Case Studies人外周血单核来源树突状细胞的制备实验方案
一、PBMC复苏复苏冻存的PBMC，室温300g离心5min。弃去上清，使用完全培养基RPMI 1640（41402ES）（含10% FBS40132ES和1%双抗60162ES）重悬细胞，并进行细胞计数与活率检测（活率应大于95%）。二、单核细胞分选方法A：贴壁纯化法（简便，适合常规实验）1. 铺板：将分离得到的单个核细胞用含血清的完全培养基重悬，调整细胞
Case Studies人T细胞激活实验方案
实验准备完全培养基配方供参考：RPMI-1640（41402ES，终浓度90%）胎牛血清（终浓度40132ES，10%）丙酮酸钠（60171ES，终浓度1x）L-谷氨酰胺（60757ES，终浓度1x）HEPES（60117ES，终浓度1x）青霉素-链霉素（60162ES，终浓度1x）β-巯基乙醇（52644ES，终浓度55μM）实验步骤一、抗体包被（实验前一
Case Studies人初始CD4+ T细胞分化Th17细胞试验方案
一、包被anti-human CD3 mAb以激活T细胞1. 使用无菌PBS（41403ES）将anti-human CD3 mAb（32102ES）稀释至工作浓度（5 µg/mL）。2. 将稀释后的anti-human CD3 mAb按每孔1mL加入24孔细胞培养板中包被，在37°C条件下孵育2小时，或在4°C下孵育过夜。二、接种细胞并启动Th17极化1、
Case StudiesTHP-1细胞诱导M1/M2型巨噬细胞实验方案
实验原理THP-1细胞为悬浮生长的人单核细胞系，PMA可激活蛋白激酶C（PKC）信号通路，促使其周期停滞、表达黏附分子，分化为贴壁生长的M0型巨噬细胞（具备巨噬细胞基础表型与功能）。后续通过不同细胞因子微环境调控极化方向：LPS（脂多糖）联合IFN-γ可激活NF-κB通路，诱导M0向促炎的M1型极化，高表达促炎因子与CD86等标志物；IL-4联合IL-13可
Case StudiesRaw264.7诱导破骨细胞实验方案
一、破骨细胞前体细胞接种1. 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清（40132ES）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。2. 将细胞以2.5×10³cells/mL的密度，接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1 mL细胞悬液。3. 将培养板置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中静置培养18小时，使细胞充分贴壁
Case Studies小鼠RAW264.7细胞诱导为巨噬细胞实验方案
实验步骤一、M1极化1.接种：6孔细胞培养板（84011ES），每孔2×105个细胞（细胞不宜过多，否则影响极化效果），37°C，5% CO₂培养24h，让其充分贴壁。2.M1型诱导：将培养基更换为DMEM（41401ES）+2%FBS(40132ES)(减少血清中细胞因子的影响)，并加入重组小鼠IFN-γ（91212ES，25 ng/mL）和LPS（607
Case Studies小鼠T细胞激活实验方案
实验准备完全培养基配方供参考：RPMI-1640（41402ES，终浓度90%）胎牛血清（终浓度40132ES，10%）丙酮酸钠（60171ES，终浓度1x）L-谷氨酰胺（60757ES，终浓度1x）HEPES（60117ES，终浓度1x）青霉素-链霉素（60162ES，终浓度1x）β-巯基乙醇（52644ES，终浓度55μM）实验步骤-抗小鼠CD3单克隆抗
Case Studies流式新手必读：流式细胞染色protocol
一. 实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）的核心原理是利用流式细胞仪对快速直线流动的单个细胞或颗粒进行多参数、高通量的定量分析及物理分选。当单个细胞逐一通过激光检测区时，仪器会为每个细胞获取三类核心参数：前向散射光（FSC，指示细胞大小）、侧向散射光（SSC，反映细胞颗粒度或复杂度），以及由特定标记（如抗体或染料）发出的荧光信号。该技术
Case Studies类器官构建指南丨胃癌类器官篇
胃癌是全球发病率和死亡率均位居前列的恶性肿瘤，中国新发病例约占全球44%，早期胃癌检出率仅约20%，五年生存率不足30%。胃癌的高度异质性是制约诊疗效果的核心瓶颈，传统二维细胞培养无法模拟体内三维微环境，动物模型则存在周期长、成本高、种属差异等局限。图1. 2020年全球胃癌发病率类器官技术为这一困境提供了有效路径。胃癌类器官来源于患者自身肿瘤组织，完整保留
Case Studies类器官构建指南丨肠癌类器官篇
结直肠癌是我国发病率第二位、死亡率第四位的恶性肿瘤，新发病例约52万/年。其中低位直肠癌占比较高（60%-75%），且青年人直肠癌比例（10%-15%）呈上升趋势。图1. 2022年全球肠癌发病率传统研究模型的局限十分明显：2D细胞系无法模拟体内三维微环境与肿瘤异质性，动物模型则周期长、成本高、存在种属差异。类器官技术为这一困境提供了有效路径——肠癌类器官来
Case StudiesBCECF,AM检测活细胞pH的Protocol
背景介绍正常细胞内 pH（6.8-7.4）在细胞的生理活动中起着至关重要的作用，是细胞内酶活性和生理功能的重要决定因素，细胞内的酸化作用与细胞凋亡有着很大的关联，细胞凋亡或者病变的发生通常伴随着细胞内pH的下降。产品简介亲脂性的BCECF-AM（Cat#40701ES）其本身不发荧光，但其可以轻易地穿过细胞膜进入到细胞内，当AM基团经酯酶水解成为亲水性的荧光
Case StudiesDiR标记外泌体protocol
背景介绍在此前的外泌体专题中为大家分享过“吐血整理外泌体标记大法(附原文献)”，这次带来外泌体提标记的protocol，为外泌体的荧光标记操作提供参考。外泌体是含有磷脂双分子层膜结构的囊泡，用亲脂性的膜染料可以进行外泌体染色标记是比较常用且方便的，亲脂性膜染料标记外泌体的原理是：亲脂性荧光探针含有长脂肪族尾巴插入到外泌体磷脂双分子层后可以发出强烈的荧光。常用
Case Studies大鼠原代皮层神经元和海马神经元提取与培养实验方案
大鼠原代皮层与海马神经元体外培养是神经发育、突触可塑性、神经退行性疾病机制研究及药物筛选的经典体外模型，是神经生物学研究的核心技术手段，而实验动物与原代神经元类型的科学提取与培养，是保障实验数据精准可靠的关键前提。本文详细描述了大鼠皮层神经元和海马神经元原代培养的制备方法，旨在标准化获取海马神经元和大脑皮层神经元原代培养物的操作流程，为神经退行性疾病机制探索
Case StudiesAntarctic Phosphatase (AnP) 实验操作指南
—————————DNA/RNA 去磷酸化、载体构建与蛋白研究一站式方案Antarctic Phosphatase(简称 AnP,Cat#14511ES)由大肠杆菌重组表达来源于 Antarctic bacterium 的 TAB5 AP 基因。该酶可非特异性催化 DNA 和 RNA 的5′及3′末端磷酸单酯水解，同时可高效水解 NTP 和 dNTP，并对蛋
Case Studies热敏磷酸酶AnP：消除载体自连、清除IVT杂质，一站式优化环状RNA制备全流程
随着 mRNA 疫苗实现产业化落地，核酸药物研发迎来全新发展阶段。传统线性 mRNA 存在易被核酸酶降解、体内蛋白表达周期短、需高价修饰核苷、免疫原性不可控等短板，限制长效治疗场景应用。环状 RNA（circRNA）凭借独特共价闭合结构脱颖而出，成为疫苗、基因治疗领域新一代热门研发载体，国内多款 circRNA 候选药物已推进至 IND 阶段。对比线性 mR
Case StudiesRNA电泳可以使用DNA Marker吗？
准备进行RNA电泳时，发现手边只有DNA Marker。RNA和DNA都是核酸，看起来差不多，那DNA Marker能用来指示RNA大小吗？还是说必须购买专门的RNA Marker？这个问题看似简单，但涉及RNA与DNA在结构、构象和电泳行为上的本质差异。本文将详细解释这些差异，告诉你什么情况下可以凑合用，什么情况下必须严格区分。原则上RNA电泳是不能直接使
Case StudiesT4 DNA连接酶(T4 DNA Ligase)实战指南：NGS文库构建中接头连接优化方案
二代测序（NGS）凭借高通量、低成本、高分辨率优势，现已广泛应用于肿瘤液体活检、单细胞基因组分析、病原微生物检测、遗传变异筛查、群体基因组学等科研与临床检测领域。完整 NGS 检测流程分为核酸提取、文库构建、上机测序、数据分析四大环节，文库构建是承上启下的核心步骤，直接决定下机数据质量、有效比对率与突变检出灵敏度。其中接头连接作为文库制备关键节点，连接效果优
Case StudiesT4 DNA连接酶(T4 DNA Ligase)实战指南：TA/平端克隆连接效率提升全攻略
场景速览：你刚 PCR 扩增出一个目的基因片段，需要把它连入载体。或者你用限制性内切酶（restriction enzyme）处理了载体和插入片段，准备进行酶切-连接反应。但实验总是卡在连接这一步——转化后平板上要么一片空白，要么全是蓝斑（自连背景）。T4 DNA Ligase 的连接效率到底如何优化？本文将拆解 TA 克隆和传统酶切-连接法克隆中 T4 D
Case StudiesT4 DNA连接酶(T4 DNA Ligase)实战指南：酶切-连接全流程实战，从载体处理到转化
酶切-连接（Restriction Digestion + Ligation）是分子克隆最经典、使用最广泛的技术路线。然而，从双酶切策略、载体去磷酸化到连接体系优化，每一步都藏着影响阳性率的细节。本文以翌圣Hieff® Gold T4 DNA Ligase（Cat#10300ES）为核心，梳理从载体处理到获得克隆的完整操作流程。一、双酶切：克隆成功的基石1.
Case StudiesSD培养基配制方案
合成缺陷培养基Synthetic Dropout Medium（SD）是酵母遗传操作中最常用的选择性培养基之一，广泛应用于酵母转化子筛选、质粒维持、酵母双杂交/单杂交、蛋白互作验证及基因功能互补实验。其核心原理是通过人为缺失一种或多种氨基酸、腺嘌呤或尿嘧啶等营养成分，建立特定筛选压力，使只有携带相应营养互补基因的酵母细胞才能正常生长。与YPD等复合培养基不同
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