Case Studies干细胞&小分子化合物 | 前列腺素E2调控脊椎动物造血干细胞稳态研究案例解析
—— 靶向炎症信号通路增强造血干细胞归巢与移植潜能一、研究背景造血干细胞（Hematopoietic Stem Cells, HSCs）是造血系统的基石，具有自我更新和分化为所有血液细胞谱系的能力，是骨髓移植和基因治疗的核心细胞来源。然而，临床造血干细胞移植面临供体不足、移植后造血重建延迟等关键问题，其根本原因在于对 HSC 体内稳态调控机制的理解不足，以及
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Case Studies干细胞&小分子化合物 | 人源神经干细胞体外培养与扩增案例
—— 精准调控 SMAD/Wnt 信号轴定向诱导神经谱系特化与干性维持一、研究背景神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）是一类具有自我更新能力并能够分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多潜能干细胞，广泛用于神经发育、神经退行性疾病以及再生医学研究。传统神经诱导体系存在效率低、稳定性差、操作复杂等问题，近年来研究表明，通过小分子精准
Case Studies人B细胞极化实验方案
实验步骤1.细胞准备：将PBMC根据需求加到24孔/48孔/6孔细胞培养板（84013ES/84014ES/84011ES）或培养皿（84002ES）中，细胞密度调整为5×104-2×105/mL2.细胞培养基配制：用RPMI-1640（41402ES）加10%灭活人血清，55 μM β-巯基乙醇（52644ES），100ng/ml IL-2（90213ES
Case Studies人单核细胞来源破骨细胞培养方案
实验步骤一、人单核细胞获取1. PBMC分离①采集外周血于EDTA抗凝采血管中，将血液混匀于无菌50 mL管(83507ES)中，PBS 1:1（41403ES）稀释血液标本②取干净的50 mL管，淋巴细胞分离液(40503ES)、血液、PBS以1:1:1加入，每管15 mL分离液，用10 mL移液管，沿管壁缓缓加入上述血液稀释液至45 mL刻度处，切忌分离
Case Studies人外周血单核来源树突状细胞的制备实验方案
一、PBMC复苏复苏冻存的PBMC，室温300g离心5min。弃去上清，使用完全培养基RPMI 1640（41402ES）（含10% FBS40132ES和1%双抗60162ES）重悬细胞，并进行细胞计数与活率检测（活率应大于95%）。二、单核细胞分选方法A：贴壁纯化法（简便，适合常规实验）1. 铺板：将分离得到的单个核细胞用含血清的完全培养基重悬，调整细胞
Case Studies人T细胞激活实验方案
实验准备完全培养基配方供参考：RPMI-1640（41402ES，终浓度90%）胎牛血清（终浓度40132ES，10%）丙酮酸钠（60171ES，终浓度1x）L-谷氨酰胺（60757ES，终浓度1x）HEPES（60117ES，终浓度1x）青霉素-链霉素（60162ES，终浓度1x）β-巯基乙醇（52644ES，终浓度55μM）实验步骤一、抗体包被（实验前一
Case Studies人初始CD4+ T细胞分化Th17细胞试验方案
一、包被anti-human CD3 mAb以激活T细胞1. 使用无菌PBS（41403ES）将anti-human CD3 mAb（32102ES）稀释至工作浓度（5 µg/mL）。2. 将稀释后的anti-human CD3 mAb按每孔1mL加入24孔细胞培养板中包被，在37°C条件下孵育2小时，或在4°C下孵育过夜。二、接种细胞并启动Th17极化1、
Case StudiesTHP-1细胞诱导M1/M2型巨噬细胞实验方案
实验原理THP-1细胞为悬浮生长的人单核细胞系，PMA可激活蛋白激酶C（PKC）信号通路，促使其周期停滞、表达黏附分子，分化为贴壁生长的M0型巨噬细胞（具备巨噬细胞基础表型与功能）。后续通过不同细胞因子微环境调控极化方向：LPS（脂多糖）联合IFN-γ可激活NF-κB通路，诱导M0向促炎的M1型极化，高表达促炎因子与CD86等标志物；IL-4联合IL-13可
Case StudiesRaw264.7诱导破骨细胞实验方案
一、破骨细胞前体细胞接种1. 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清（40132ES）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。2. 将细胞以2.5×10³cells/mL的密度，接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1 mL细胞悬液。3. 将培养板置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中静置培养18小时，使细胞充分贴壁
Case Studies小鼠RAW264.7细胞诱导为巨噬细胞实验方案
实验步骤一、M1极化1.接种：6孔细胞培养板（84011ES），每孔2×105个细胞（细胞不宜过多，否则影响极化效果），37°C，5% CO₂培养24h，让其充分贴壁。2.M1型诱导：将培养基更换为DMEM（41401ES）+2%FBS(40132ES)(减少血清中细胞因子的影响)，并加入重组小鼠IFN-γ（91212ES，25 ng/mL）和LPS（607
Case Studies小鼠T细胞激活实验方案
实验准备完全培养基配方供参考：RPMI-1640（41402ES，终浓度90%）胎牛血清（终浓度40132ES，10%）丙酮酸钠（60171ES，终浓度1x）L-谷氨酰胺（60757ES，终浓度1x）HEPES（60117ES，终浓度1x）青霉素-链霉素（60162ES，终浓度1x）β-巯基乙醇（52644ES，终浓度55μM）实验步骤-抗小鼠CD3单克隆抗
Case Studies流式新手必读：流式细胞染色protocol
一. 实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）的核心原理是利用流式细胞仪对快速直线流动的单个细胞或颗粒进行多参数、高通量的定量分析及物理分选。当单个细胞逐一通过激光检测区时，仪器会为每个细胞获取三类核心参数：前向散射光（FSC，指示细胞大小）、侧向散射光（SSC，反映细胞颗粒度或复杂度），以及由特定标记（如抗体或染料）发出的荧光信号。该技术
Case Studies类器官构建指南丨胃癌类器官篇
胃癌是全球发病率和死亡率均位居前列的恶性肿瘤，中国新发病例约占全球44%，早期胃癌检出率仅约20%，五年生存率不足30%。胃癌的高度异质性是制约诊疗效果的核心瓶颈，传统二维细胞培养无法模拟体内三维微环境，动物模型则存在周期长、成本高、种属差异等局限。图1. 2020年全球胃癌发病率类器官技术为这一困境提供了有效路径。胃癌类器官来源于患者自身肿瘤组织，完整保留
Case Studies类器官构建指南丨肠癌类器官篇
结直肠癌是我国发病率第二位、死亡率第四位的恶性肿瘤，新发病例约52万/年。其中低位直肠癌占比较高（60%-75%），且青年人直肠癌比例（10%-15%）呈上升趋势。图1. 2022年全球肠癌发病率传统研究模型的局限十分明显：2D细胞系无法模拟体内三维微环境与肿瘤异质性，动物模型则周期长、成本高、存在种属差异。类器官技术为这一困境提供了有效路径——肠癌类器官来
Case StudiesBCECF,AM检测活细胞pH的Protocol
背景介绍正常细胞内 pH（6.8-7.4）在细胞的生理活动中起着至关重要的作用，是细胞内酶活性和生理功能的重要决定因素，细胞内的酸化作用与细胞凋亡有着很大的关联，细胞凋亡或者病变的发生通常伴随着细胞内pH的下降。产品简介亲脂性的BCECF-AM（Cat#40701ES）其本身不发荧光，但其可以轻易地穿过细胞膜进入到细胞内，当AM基团经酯酶水解成为亲水性的荧光
Case StudiesDiR标记外泌体protocol
背景介绍在此前的外泌体专题中为大家分享过“吐血整理外泌体标记大法(附原文献)”，这次带来外泌体提标记的protocol，为外泌体的荧光标记操作提供参考。外泌体是含有磷脂双分子层膜结构的囊泡，用亲脂性的膜染料可以进行外泌体染色标记是比较常用且方便的，亲脂性膜染料标记外泌体的原理是：亲脂性荧光探针含有长脂肪族尾巴插入到外泌体磷脂双分子层后可以发出强烈的荧光。常用
Case Studies细胞转染 | hPDLC人牙周膜细胞DNA转染案例
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代（T25）润洗：吸弃旧培养基，加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化：加入1 mL胰酶润湿瓶底，37°C孵育消化。吹落：待细胞间隙变大、形态变圆时，直接用胰酶
Case Studies细胞转染 | MLE-12小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA转染案例
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代（T25）润洗：吸弃旧培养基，加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化：加入1 mL胰酶润湿瓶底，37°C孵育消化。吹落：待细胞间隙变大、形态变圆时，直接用胰酶
Case Studies细胞转染 | NTHY人正常甲状腺滤泡上皮细胞DNA转染案例
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代（T25）润洗：吸弃旧培养基，加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化：加入1 mL胰酶润湿瓶底，37°C孵育消化。吹落：待细胞间隙变大、形态变圆时，直接用胰酶
Case Studies细胞转染 | MC3T3-E1小鼠颅顶前成骨细胞siRNA转染案例
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代（T25）润洗：吸弃旧培养基，加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化：加入1 mL胰酶润湿瓶底，37°C孵育消化。吹落：待细胞间隙变大、形态变圆时，直接用胰酶轻轻吹打下细胞。终止：加入2-3
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