应用方向miRNA定量分析，这里有方案！
miRNA表达分析解决方案，从核酸提取到定量结果
MicroRNAs（miRNAs）是一种大小约21-28个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。miRNA主要与靶基因mRNA3‘端非编码区域特异性结合，调控转录后靶基因mRNA的翻译过程，从而阻断mRNA翻译和促进mRNA降解导致蛋白质表达降低。miRNA的作用涉及个体发育、组织分化、细胞增殖和细胞凋亡等多种心血管疾病的发生发展。
图.miRNA体内合成示意
19331ES-MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒
快速，简捷，可在30分钟内完成miRNA提取
不用乙醇沉淀，减少小分子RNA丢失
成熟的miRNA的长度只有20nt左右，通常正向引物就会覆盖其全长甚至会有多余部分，反向引物就无处安置了。目前市面上解决方案就是在反转录时设法增加反转录产物长度。常见的方法有加尾法和茎环法。
加尾法利用PolyA 聚合酶为成熟的miRNA加上Poly(A)尾，以带有通用序列的Oligo-dT作为反转录引物，合成加长的miRNA对应cDNA第一链。茎环法以折叠为茎环结构的通用序列作为引物合成加长的miRNA对应cDNA第一链，后续扩增过程中，茎环结构在适宜的温度下会被打开，和相关扩增引物结合。
图. 加尾法合成miRNA |
图. 加尾法合成miRNA |
类别 | 加尾法 | 茎环法 |
适用性 | 适合于同时研究多种不同miRNA的情况 | 适合对样本中少量几个miRNA的精确定量检测 |
优点 | 一次反转录可检测多个miRNA，通量高 | 一次反转录只能检测一个miRNA，特异性强 |
反转录体系 | 内参与miRNA一起，在同一个反应体系反转录，准确性高 | 内参与miRNA分开，在两个体系分别反转录，容易产生误差 |
检测特异性 | ★★★★☆ | ★★★★★ |
检测灵敏度 | ★★★★★ | ★★★★☆ |
实验时间 | ★★★★☆ | ★★★★★ |
翌圣miRNA加尾法反转定量组合（11148ES&11171ES)
11148ES-Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit
试剂盒采用加尾法来进行miRNA第一链cDNA的反转录，产品中的2×Hifair® miRNA RT buffer包含了miRNA加尾反应和反转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3‘末端的Poly(A)修饰过程和反转录过程同时高效进行。
11171ES -Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix
专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂，含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适用于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。DNA 聚合酶采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
可兼容全平台qPCR仪器
以293T细胞的Total RNA为模板，用Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# 11148ES)进行反转录，获得的cDNA稀释10倍后，用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES)分别检测hsa-miR-let-7b-5p、hsa-miR-let-7c-5p、U6内参基因。
检出率高，最高可达10 pg
以人工合成hsa-miR-let-7e-5p(a)和293T细胞Total RNA(b)为模板，分别稀释成以下梯度：60拷贝到606拷贝（6个梯度）和10 pg-100 ng(5个梯度)，用Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# 11148ES)进行反转录，获得的cDNA用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES)检测hsa-miR-let-7e-5p基因表达情况。
高特异性，能区分同家族miRNA间单碱基差异
人类hsa-let-7家族拥有多条miRNA，彼此间相差的碱基很少，甚至只有单碱基的差异。每个Let-7亚型（hsa-miR-let-7a~Let-7i，has-miR-98）的人工合成miRNA使用 Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# 11148ES)进行反转录合成cDNA，以不用的引物，用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES)分别扩增这些miRNA，利用公式2-ΔCT x 100%计算匹配率。结果显示，可有效区分密切相关的亚型家族成员。
扩增效率出色
以人293T细胞和鼠源肝脏Total RNA为模板，扩增miR-let-7b-5p、miR-let-7c-5p、miR-let-7e-5p、miR-let-7f-5p基因。结果显示，与同类产品相比，Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# 11148ES)配套 Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES)的反应体系，具有优异的表现。
稳定性优秀，在 37℃稳定7天或冻融50次或配置体系在25℃保留48 h，效果依旧稳定
以293T细胞Total RNA为模板用Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# 11148ES) 进行反转录，获得的cDNA稀释10倍，用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES) 检测hsa-miR-let-7b-5p、hsa-miR-let-7c-5p、hsa-miR-let-7e-5p的表达情况。△Ct<0.5。
翌圣miRNA茎环法反转定量组合（11139ES&11170ES)
11139ES-Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit(gDNA digester plus)
该试剂盒基于Hifair® III Reverse Transcriptase而开发。该酶cDNA合成速度快，且热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的反转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的反转录。Hifair® III Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可合成长达19.8 kb的cDNA。
11170ES-Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix
本产品是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA定量反应的专用预混液。由于miRNA序列短，且同一家族的miRNA序列往往高度相近，故在定量时对特异性要求极高。本品基于热启动的 DNA 聚合酶，配以优化的Buffer，能够极大地减少非特异性扩增；同时，特殊的ROX Reference Dye，使得预混液适应于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。
可兼容全平台qPCR仪器
以小鼠肝脏细胞的Total RNA为模板，用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)（Cat# 11139ES）进行反转录，获得的cDNA稀释40倍后，用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat# 11170ES）分别扩增人源的mmu-miR-125a基因。
灵敏度高，可达10 pg
以小鼠肝脏细胞的Total RNA为模板，用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)（Cat# 11139ES）进行反转录，获得的cDNA 以10倍梯度稀释（范围10pg /μL-0.1μg /μL），扩增鼠源的mmu-miR-125a、mmu-miR-132、mmu-miR-351基因。
高特异性，能区分同家族miRNA间单碱基差异
人类hsa-let-7家族拥有多条miRNA，彼此间相差的碱基很少，甚至只有单碱基的差异。以不同的引物，使用 Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat# 11170ES）分别扩增这些miRNA，利用公式2^-△ct x 100%计算匹配率。
重复性好
以人293T细胞的Total RNA为模板反转录，用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)（Cat# 11139ES）进行反转录，获得的cDNA稀释50倍，使用Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat# 11170ES）进行90孔平行重复实验扩增人源的hsa-let-7a基因。
稳定性好，37℃稳定14天或冻融稳定50次或配置体系在25℃保留24h后，效果依旧稳定
以小鼠肝脏细胞的Total RNA为模板用Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)（Cat# 11139ES）进行反转录，获得的cDNA稀释100倍，扩增鼠源的mmu-miR-132基因。
方法类型 | 实验步骤 | 产品名称 | 产品货号 |
miRNA提取 | 核酸提取 | 19331ES | |
19332ES | |||
加尾法反转定量 | 反转录 | 11148ES | |
定量PCR | 11171ES | ||
茎环法反转定量 | 反转录 | Hifair®III 1st Strand cDNA Synthesis Kit(gDNA digester plus) | 11139ES |
定量PCR | 11170ES |
站内暂未收录 · 可询价 图 dsDNA HS assay Kit/ HS双链DNA定量检测试剂
站内暂未收录 · 可询价 图 1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂
站内暂未收录 · 可询价 图 dsDNA BR Assay Kit/ BR 双链DNA定量检测试剂
站内暂未收录 · 可询价 图 1×ssDNA Assay Kit 即用型ssDNA定量试剂盒
站内暂未收录 · 可询价 图 核酸定量仪荧光计Qubit（单通道）
站内暂未收录 · 可询价 图 ssDNA Assay Kit 单链DNA qubit定量试剂盒
站内暂未收录 · 可询价