本公司优化的试剂可有效降低突变假阳性率，提升文库产量，并降低嵌合reads数等，以确保实验结果的准确性与可靠性。
高通量测序产品技术咨询FAQ
Coverage（基因组覆盖度）是指测序获得的序列占整个基因组的比例，反映了测序数据对基因组的覆盖程度。其解读需结合测序深度理解：（1）测序深度定义：通常以“×”表示，例如10×测序深度指平均每个基因组位置被测序reads覆盖10次，200×则为200次。（2）覆盖度与深度的关系：一般情况下，测序深…
文库产量低可能由以下原因导致：（1） DNA 质量低，样本中含抑制物（抑制酶活性等）：Input DNA制备过程中带入的高浓度金属离子、螯合剂或其他盐，可能影响末端修复及A 尾添加等步骤的反应效率，。建议DNA 在TE 溶液中进行片段化，避免在无菌超纯水中操作。（2）RNA 污染：样本中存在RNA …
文库电泳时出现条带异常，主要原因及对应解决方式如下：（1）出现小片段（60-120bp）：此类小片段通常为接头片段或接头形成的二聚体，可使用12601ES DNA磁珠进行纯化以去除；（2）文库富集后出现大片段：文库接头长度一般约120bp，若文库片段扩增幅度超过120bp可能是PCR扩增过度导致片段…
OnePot/OnePot II DNA 建库试剂盒针对基因组 DNA 和 cDNA 均可获得高产高质的文库。以下为具体应用案例及参数：（1）案例背景：客户使用逆转录获得的双链 cDNA（ds cDNA全长约 1.1kb，需酶切至 300bp 左右用于文库构建。（2）操作参数：Input DNA 量…
若使用本公司gDNA片段化产品按说明书酶切条件（20 min）酶切后仍未达到预期效果，建议优先排查以下问题：（1）DNA质量问题：Input DNA中若引入高浓度金属离子、螯合剂或其他盐离子，可能抑制酶活性。建议将 DNA稀释至ddH₂O或不含 EDTA 的10 mM Tris Buffer (（p…
在酶切反应中，即使酶切时间较短，仍可能出现过度酶切现象。例如，以300 bp 插入片段的白细胞基因组DNA（gDNA）为例，若采用30℃、10 min的酶切条件，可能会出现过度酶切现象。本产品建议在进行酶切时，需根据不同样本的基因组DNA大小调整反应条件。对于白细胞等基因组DNA相对较小的样本，应适…
酶切法建库过程中，需从多维度进行质量控制以确保文库质量，具体如下：（1）文库浓度检测：可采用Qubit荧光定量法或qPCR法，其中Qubit法通过特异性结合dsDNA的荧光染料实现浓度精准定量，qPCR 法则基于实时荧光定量原理，二者均能有效评估文库浓度； （2）文库长度检测：使用琼脂糖凝胶电泳（推…
本产品（片段化模块酶）是随机内切酶，属于单酶体系。（1）酶类型：为随机内切酶，可对DNA进行随机切割；（2）酶体系：单酶制剂；（3）应用范围：适用于DNA片段化（如用于二代测序文库构建等场景），但酶切后产生粘性末端，需后续进行末端修复。反应条件：建议初始投入量范围为500 pg 1000 ng，在3…
本试剂盒采用转座酶进行DNA 片段化，可将传统的DNA 片段化、末端修复及接头连接等繁琐步骤整合为一步酶促反应，仅需 10分钟即可完成。
12207 适用于构建以 50 ng 为起始量的 DNA 文库，13468 适用于构建以 1 ng 为起始量的 DNA 文库。两者的核心区别在于试剂盒中酶的浓度存在差异：酶浓度不匹配可能导致模板 DNA 片段化不完全或片段大小偏大，进而使最终文库与预期结果产生偏差。因此，强烈建议根据实际的 DNA …
使用本试剂盒（货号：12207）进行文库构建时，必须进行文库扩增步骤。原因在于转座反应产物并非完整的双链DNA 文库，需通过PCR 反应生成完整的DNA文库，以满足后续测序平台（如Illumina、MGI等）的建库要求。
本产品可以作用于PCR产物，但需保证PCR产物长度>500 bp。因转座酶无法作用于DNA末端，PCR产物最末端50 bp的测序覆盖度可能会有所降低。为避免末端测序覆盖度降低，推荐在制备PCR产物时将待测区域两末端各延长50-100 bp
产品12201 适用于 500 pg至500 ng的片段化DNA 样本。
本公司建库试剂盒通常不包含接头，接头产品单独设置货号。客户可根据实验平台（如Illumina、MGI等）及样本数量等需求，选择适配的接头产品。
12199ES 与 12201ES 建库试剂盒的核心区别在于扩增模块的设计。具体选择建议如下：（1）若需高产量扩增，推荐使用 12199ES 建库试剂盒，其扩增模块适配高效扩增需求，可提升样本中目标核酸的产量；（2）如后续实验对扩增保真度要求较高（例如进行单核苷酸多态性（SNP）检测等精准分析），则…
磁珠用量参考如下表（具体用量需根据实际建库体系体积及样本类型调整）：（1）12199（Canace 血液基因组 DNA 建库试剂盒）：建议磁珠用量为体系体积的 1.8 倍（例如 100 μL 体系需 180 μL 磁珠）；（2）12200（Canace 唾液基因组 DNA 建库试剂盒）：建议磁珠用量…
末端修复/加 A 步骤需开启热盖的原因如下：（1）末端修复反应体系中，部分酶促反应（如 Taq 酶介导的延伸反应）在 72℃ 高温下进行，若热盖关闭，反应过程中产生的冷凝液会回流至反应管内，导致反应体系体积损失或局部浓度变化，影响酶活性及反应效率；（2）接头连接反应通常在较低温度（如 16℃ 左右）…
针对FFPE样本建库，建议如下：（1）对于低质量FFPE样本，可使用石蜡样本修复试剂（Cat#12606）以优化文库质量。该试剂能在末端修复步骤中同步完成样本修复，无需额外实验操作，有助于提升文库产量。（2）操作时需注意严格按照产品说明书进行样本预处理及建库流程，确保实验条件（如温度、时间等）符合要…
1）末端修复/加 A：需使用 T4 DNA 聚合酶和耐高温 Taq 酶；2）T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）；3）接头连接：需使用 T4 DNA 连接酶；4）扩增模块：12201ES 对应的扩增模块为 12621/12624 高保真 DNA 聚合酶；12199ES 对应的扩增模块为 12620E…