高通量测序产品技术咨询FAQ

本公司磁珠可吸附双链DNA和单链DNA，但无法区分单链与双链DNA。若需纯化单链DNA，其纯化倍数可参考本公司对应双链DNA纯化产品的说明书进行操作。

12601ES为非特异性吸附磁珠，在吸附DNA的同时也会吸附RNA。若需去除样本中的RNA，建议使用RNase A进行处理。

本产品暂不建议用于RNA纯化和分选。虽然磁珠可吸附RNA片段，但本产品配套Buffer是根据DNA特性设计的，不利于RNA结构的稳定。若需进行RNA纯化，建议使用专门的RNA纯化磁珠（货号12602ES)）。

本产品的RNA结合载量无具体参考值，建议参照使用说明书中的体系进行操作。单次反应若为50μL体积的样本，使用1.8~2倍磁珠（即100μL磁珠）时，可纯化0.5~5µg RNA。

本产品可以回收小RNA。需要注意的是，本产品的回收率未针对小RNA进行专门测试，通常适用于总RNA（Total RNA）的纯化。

正常磁珠在静置状态下，微珠会与缓冲液（buffer）自然分层并聚集于瓶身底部；使用前需进行震荡混匀操作，使微珠均匀分散在缓冲液中。若磁珠出现以下非正常状态，可能表明其均一性受影响：（1）磁珠粘稠度异常升高，无法通过常规震荡充分分散；（2）磁珠聚集成块，肉眼可见明显的块状聚集物；（3）磁珠出现挂壁现象…

RNA磁珠主要用于RNA的纯化，例如12602ES：货号的RNA 纯化磁珠；12603货号的真核生物完整mRNA 抓取磁珠，可用于真核生物完整mRNA的特异性捕获。

磁珠沉淀异常可能由以下原因导致：（1）样本问题：样本中含高浓度糖类或蛋白质，可能影响磁珠与目标物质的结合效率；或样本buffer与磁珠buffer的成分存在冲突，干扰磁珠的分散性和吸附性能。（2）磁珠问题：磁珠 buffer 被污染，可能引入杂质影响磁珠的正常功能。（3）操作问题：干燥时间过长（一般…

本产品的磁珠不可以重复使用。原因是乙醇洗脱步骤会影响磁珠表面活性基团的性能，进而可能导致后续实验效果不稳定或失效。

不建议使用DNA纯化磁珠代替RNA纯化磁珠。原因如下：（1）RNA分子结构相对脆弱，对环境因素（如温度、pH、酶污染等）更为敏感，DNA纯化磁珠的体系设计通常更侧重于DNA的吸附与洗脱，可能无法有效维持RNA的结构稳定性，增加RNA降解风险；（2）RNA纯化磁珠的优化体系（如特定的裂解缓冲液、盐浓度…

磁珠未开封时建议4℃保存，开封后若长期室温放置可能会影响其回收性能，因此不建议室温长时间放置。使用完毕后，建议立即将磁珠重新密封并放回4℃环境保存。PEG（聚乙二醇）的分离效果易受pH值、温度等因素影响，操作时需注意控制相关条件以确保实验结果的稳定性。

磁珠回收率低可能的原因及对应建议如下：（1）磁珠与待处理物质（如DNA ）混匀不充分，导致磁珠未能充分吸附目标物质。建议在反应体系中充分混匀磁珠与待处理物质，确保充分接触。（2）磁珠比例设置不当。请严格按照产品说明书推荐的比例选择磁珠用量，以保证最佳吸附效果。（3）孵育时间不足。为确保磁珠与目标物质…

若磁珠仅短暂放置于-20℃且未结冰（即未发生冻结），通常不影响其后续使用。但需注意：（1）若磁珠长时间处于低温环境（如过夜或更长时间），可能导致其结构稳定性下降，进而影响分选或纯化性能；（2）建议在使用前对磁珠进行一次短时间的室温平衡，以确保其充分恢复活性。实际使用效果可能因具体产品特性及实验条件存…

本产品需根据具体仪器类型选择合适的参比染料（如ROX），以确保实验数据的准确性和可靠性。不同仪器可能对参比染料的兼容性和浓度有特定要求，建议参考仪器操作手册或本公司技术支持文档进行匹配。

12601ES可以用于纯化150bp以上的DNA片段。若待纯化的DNA中含有较多150bp以下的片段，建议选用货号12600ES的产品，该产品可纯化50bp以上的DNA。

本产品（货号12601ES）的分选体系针对特定片段范围进行了优化，目前确定的有效分选片段范围需参考产品说明书中的标准体系。若需分选1Kb或以上的DNA片段，建议在标准体系基础上进行条件摸索和验证，以确保分选效果。

接头中 index/Barcode 的组合原则主要包括以下两点：（1）碱基平衡：确保接头序列中 A、T、C、G 四种碱基的含量相对均衡，以避免因碱基组成差异导致的扩增偏差或测序信号异常；（2）荧光平衡：对于带有荧光标记的 index/Barcode，需保证不同 index/Barcode 组合的荧光…

双端接头连接过程的注意事项如下：（1）接头连接时，需确保反应体系中DNA片段、接头及连接酶（如T4 DNA Ligase）的比例合适，且避免过度连接导致的非特异性产物。（2）长接头与短接头的区别主要在于序列组成：长接头（如带完整Index序列的接头）可直接完成文库构建，若样本投入量多（一般需要2μg…

Set 1 和 Set 2 均包含 96 种不同的引物组合，两者合并后可覆盖 384 种引物组合。推荐原则如下：（1）若客户单次上机检测样本数量低于 96 个，可根据实际实验需求选择 Set 1 或 Set 2 中的任意一组进行使用；（2）若客户实验需检测 96 个以上样本，建议同时使用 Set 1…

P5和P7引物预混液的总浓度为15μM，其中P5和P7引物各自的浓度为7.5μM。