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高通量测序产品技术咨询FAQ中心

Q:使用该产品时能否用单酶搭配机械法流程建库试剂盒,如 12907ES+12199ES?

可以使用单酶(Cat#12907ES)搭配机械法流程建库试剂盒(如Cat#12199)进行建库。但本公司建议购买完整试剂盒(Cat#12204),该试剂盒经过流程优化,可获得优异的建库表现。若选择使用Cat#12907ES搭配其他品牌建库试剂盒,建议在片段化后先进行纯化,再衔接其他品牌建库试剂盒。

DNA建库 👁 81 🔖 12907ES, 分子类, NGS, DNA建库系列
Q:gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min,依然片段偏大是什么原因?

若使用本公司gDNA片段化相关产品(如酶切试剂)按说明书酶切条件(20 min)仍出现酶切不完全的情况,可优先考虑以下因素:(1)DNA质量问题:Input DNA中若含有高浓度金属离子螯合剂(如EDTA)或其他盐离子,可能会抑制酶活性,建议将DNA稀释至ddH₂O或不含EDTA 的 10 mM T…

DNA建库 👁 83 🔖 12907ES, 分子类, NGS, DNA建库系列
Q:酶切时间不长,但仍然出现过度酶切的情况,是什么原因?

在酶切反应中,即使酶切时间较短,仍可能出现过度酶切现象。例如,以300 bp 插入片段的白细胞基因组DNA(gDNA)为例,若采用30℃、10 min的酶切条件,可能会出现过度酶切现象。本产品建议在进行酶切时,需根据不同样本的基因组DNA大小调整反应条件。对于白细胞等基因组DNA相对较小的样本,应适…

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Q:片段化与样本量、酶切时间、样本片段长度有关吗?

本产品的片段化效果与样本量和酶切时间相关,具体表现为:(1)酶切时间越长,片段化后的产物长度越短;(2)产品设置了小片段保护机制,最短可达到100~150bp左右;(3)建议按照说明书推荐的样本投入量进行操作,若超出推荐范围,需自行摸索合适的反应体系。

DNA建库 👁 68 🔖 13321ES, 分子类, NGS, DNA建库系列
Q:酶切法片段化后,大小与预期不符?

酶切法片段化后,若片段大小与预期不符,可从以下方面排查:(1)样本质量:需确认样本纯度是否正常,若样本中杂质(如蛋白、盐离子等)较多,可能会影响酶活性,进而导致片段化效果异常。(2)操作因素:检查酶切反应的时间把控是否准确,过度酶切或酶切不充分均可能导致片段大小偏离预期。建议片段化体系在冰上配置,以…

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Q:12204ES、12907ES 和 12609ES 区别与联系?

12204ES 为完整的建库试剂盒,包含片段化模块、连接模块及扩增模块,适用于从起始样本到完成文库构建的全流程需求。12609ES 为片段化模块,可同时完成样本的片段化、末端修复及加 A 流程,需配合其他模块(如连接、扩增模块)共同使用以完成文库构建。12907ES 为单酶(原料酶),仅用于 DNA…

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Q:OnePot DNA 建库试剂盒是一管完成建库,具体哪几步是一起完成,可以用哪几个建库模块替代?

OnePot DNA 建库试剂盒可实现片段化、末端修复/A 尾添加、接头连接三步一管完成建库。具体对应建库模块及替代方案如下:(1)片段化/末端修复/加 A 模块:可使用货号 12609 试剂盒完成;(2)接头连接模块:可使用货号 12607 试剂盒完成;(3)文库扩增模块:可使用货号 12621…

DNA建库 👁 38 🔖 12609ES, 分子类, NGS, DNA建库系列
Q:12626 产品连接buffer 比较粘稠,如果不混匀会造成什么影响?

连接反应中若连接buffer混合不充分(如未充分混匀),可能导致酶与底物接触不充分,进而影响连接效率,最终造成文库产量降低。为确保连接反应混合均匀,建议通过以下方式操作:(1)将反应管上下颠倒10 次;(2)使用漩涡混合器短暂混匀3 秒。

DNA建库 👁 43 🔖 12626ES, 分子类, NGS, DNA建库系列
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