蛋白免疫产品技术咨询FAQ

推荐使用 PBS。

DMSO 中的溶解度 : 50 mg/mL (123.63 mM; 超声助溶; 吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响，请使用新开封的 DMSO) H2O 中的溶解度 : 

如果不能测定 405nm，也可以在 400-415nm 范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可以在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时（≤ 6h）内稳定。

建议延长孵育时间至 30min。

ALP 反应缓冲液和 p-nitrophenol 标准品溶液对人体有害，请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性，请小心操作。最好在通风橱里操作。

首先，绘制标曲：0.5mM*标准品的用量分别为4、8、16、24、32和40微升，用微摩尔数做横坐标，标曲方程可通过Excel做；然后，根据标准曲线及待检测样品的吸光度值，可以计算得到样品中p-nitrophenol生成量。再根据酶活性定义进行计算。即p-nitrophenol的微摩尔数除以孵育时间…

我们没有专门的EMSA电泳液，但可以购买TBE(货号：60144ES),稀释成0.5×或1×使用。

不同厂家生产的预染蛋白Marker由于使用的染料种类、标记工艺或缓冲体系不同，可能导致电泳条带出现不同程度的偏移（即表观分子量与实际分子量的差异），无法达到完全一致的效果，可以参考官网的跑胶对比图。若需精确判断条带分子量，可使用非预染蛋白Marker作为对照标定，实验时请以说明书提供的参考条带位置为…

10mg规格其体积大约3.5ml，5mg规格约1.7ml。

2.7kDa的蛋白浓度是0.16 μg/μL。

跑胶条件为140 V，120分钟。

平均每条带的蛋白浓度为0.5-1.2 μg/μL。

平均每条带的蛋白浓度为0.9-2.8ug/10ul.

不可以。因为本产品含 SDS，蛋白已变性，其分子量是在 SDS 变性体系下标定的——蛋白与 SDS 结合后自身电荷被掩盖，迁移率只取决于分子量。而天然蛋白电泳中蛋白保持天然构象和净电荷，迁移速率由分子大小、形状和电荷共同决定，同分子量的蛋白迁移位置差异很大。

预染蛋白Marker由于和染料结合，在不同电泳体系中位置是偏移的，条带位置仅供参考。 因为染料和蛋白结合后，一般都会比本来蛋白跑得更快一些的 ，我们和非预染Marker标定过的。比如有些厂家的180KD条带在Bis-Tris体系中的实际位置为140KD，而我们的180KD条带在Bis-Tris体系中…

对于5μL上样的marker，每条带平均蛋白含量约为2.5ug。

理论来说marker没有抗体结合位点，不会被显影，但是如果和目的蛋白有i相似的结合位点会被抗体识别到，进而被显影。赛默飞也有对marker显影的相关解释。这种可能性无法避免。

通常情况下，转膜后预染marker条带会更鲜亮，如果颜色变淡，可能有几种情况：（1）转印不完全操作不当，比如，转膜没有加冰袋，温度过高；胶和滤纸没夹紧。转膜条件不适合，转膜时间过长可能透膜，转膜时间过短，蛋白可能残留在胶内。膜没有充分活化，甲醇浓度太高易造成蛋白穿膜，转移到滤纸上；未活化可能也可能导…

可能使用了比较特殊的缓冲液或者洗涤强度过强。建议使用通用缓冲液，或品质有保障的商用缓冲液，适当洗涤。较小孔径的膜可以在封闭和洗涤过程中更好地保留蛋白质。

使用本产品可动态观察蛋白电泳状态和转膜效果。经 SDS-PAGE 电泳后转移到PVDF 膜、NC 膜上可见清晰的彩色条带。