活体成像FAQ

母液：称取 1 mg 天然腔肠素粉末直接溶于 197 μL 酸化甲醇（100% 甲醇含 20 μL/mL 3 M 或 6 M HCl），配成 12 mM（约 5 mg/mL，5×）储存液；工作液如体外 10^5 细胞数可用 10 μM。具体工作浓度建议参考文献做梯度摸索。

化学发光，无需激发波长。萤火虫荧光素发射波长约 560 nm；海肾荧光素发射波长约 465 nm。

可以。D-荧光素可通过血脑屏障、胎盘屏障和血液-睾丸屏障，也能进入活细胞，因此可用于体内外活体成像。

D-荧光素腹腔注射小鼠后约 3 min 开始发光，10 min 达稳定最高点，维持约 10-15 min 后衰减，可在注射后 10-15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶动力学曲线，确定最高信号检测时间与平台期。

体外：细胞孵育 10-15 min 后立即检测；体内：可在注射后 10-15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶动力学曲线，确定最高信号检测时间与平台期。

体外储备液（100 mM，约 30 mg/mL）用无菌蒸馏水溶解，现配现用；1× 工作液（0.5 mM，约 150 μg/mL）用预热培养基稀释。动物实验 15 mg/mL 储存液用不含钙镁的 DPBS 溶解（钙镁影响胰酶/底物氧化），0.22 μm 过滤除菌，现配现用。除 DPBS 外也可用生理盐…

注射方式：可通过腹腔注射或尾静脉注射。剂量建议根据动力学曲线评估；文献起始剂量约 150 mg 底物/kg 小鼠体重（如 10 只 22-25 g 小鼠约需 33-37.5 mg）。具体请结合预实验确定。

成功需满足：①目的组织或细胞表达荧光素酶基因；②荧光素底物注射成功；③依赖发光部位的组织厚度。若不成功，可从荧光素酶是否表达、底物是否正确注射、发光部位是否过深等方面排查。

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物：在 ATP 和荧光素酶作用下被氧化发光，荧光素过量时发光强度与荧光素酶浓度呈正相关。天然腔肠素（Coelenterazine）则是海肾荧光素酶（Rluc）、Gaussia 荧光素酶（Gluc）等的作用底物。

推荐：①具备生物化学发光检测模块的仪器，如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统、Bruker In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪；②多功能酶标仪需确认具备生物化学发光检测模块（注：不能用荧光显微镜）。

主要在三方面：①溶解性——盐形式易溶于水（钾盐 60 mg/mL、钠盐 100 mg/mL），自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠弱碱调节，甲醇中 10 mg/mL、DMSO 中 50 mg/mL；②毒性——盐形式尤体内成像更方便、毒性更小；③使用效果——无明显差异，体内研究钾盐使用率较高。

有影响。 D-荧光素的纯度直接影响活体成像的信号强度，建议检测选用纯度 ≥99% 的产品。

荧光素钠盐可用于细胞通透性检测，通过检测荧光值（490/514nm)测定物质通透性；D-荧光素钠盐用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不需要激发。萤火虫荧光素酶只识别 D 型，可以产生生物发光，是活体成像、报告基因实验的标准底物。做萤火虫荧光素酶 / 活体成像：必须选 D‑荧光素钠盐（或…

除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用，如体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等。

腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶(Rluc)，Gaussia 分泌型荧光素酶 (Gluc)，以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白 (Photoproteins)。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生…

水或PBS，注意需要不含钙镁离子。Mg2+是催化荧光素底物氧化的重要因素，而 Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子。

可以作为Gaussia荧光素酶(Gluc)的底物，目前只有这一款腔肠素可以作为Gluc的检测底物。

该产品体外成像，所需的ATP和镁离子，1.需要通过细胞培养基来实现。所以需要添加了ATP和镁离子的细胞培养基来稀释探针；2.细胞内本身也含有一定量的ATP和镁,可以促进反应。大部分情况下，细胞含有的ATP和镁是足够进行D-荧光素盐的反应的，但细胞种类不同，含量也不一样。可以先尝试培养基不加额外的AT…

无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2 -thiazoline-4-carboxylic acid。

除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等