-80ºC 保存没有测试过,建议用-20ºC 保存。
PCR系列FAQ
用无菌水稀释即可,稀释后能保存多久暂未有明确验证数据,建议现稀释现用。
a)原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性,即有校正功能。b)Taq 酶错配率:2*10-4,0.0002,大约5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约0.00039%,是 taq 酶的 52 倍。c)高保真酶是突变概率低,但不是绝对的不突变。
仅供参考:先对平末端PCR 产物纯化后,浓度要求至少 20ng/ ul(跑胶图像条带清晰,明亮即可),取 14.5 ul PCR 产物,加入 2 ul Taq Buffer,3ul dNTP,0.5 ul Taq酶,在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加A 尾的DNA 片段。
验证范围内长度理论上是可以的(验证范围:简单模板 20kb,复杂模板 10kb)。但具体能否扩出,还与模板和引物等有关。
原因 1:模板突变。 1.原始模板序列有突变。原因:原始模板序列有突变会使扩增产物的突变位点恒定,表现在多个克隆测序发生突变,且突变位置恒定。判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,测序结果与模板序列对比,发生突变且位置恒定,可认为是模板序列发生突变。优化方法:更换序列正确的模板。2.保存…
10102ES 和 10103ES 同属 2× Hieff® PCR Master Mix 系列,核心区别只有一个:是否含溴酚蓝染料。10102ES后续可直接进行凝胶电泳。而 10103ES中无溴酚蓝指示剂,电泳时需要添加DNA loading buffer。
不建议,PCR Mx 中含有影响 PAGE 胶电泳的成分。推荐使用2× Hieff® PCR Master Mix for PAGE(Cat No.10160ES)