50 mM Tris，5 mM EDTA-Na，50 mM L-半胱氨酸，pH 8.5。
可能是筛板被堵塞，建议清洗或更换筛板。
可能是蛋白或多肽不溶，建议偶联液中加入＜30%的 DMSO 或DMF 或 6 M 盐酸胍促进样品溶解。
可能是树脂没有彻底清洗，建议增加结合/洗杂液体积。
偶联原理如图，偶联液的要求是中性偏碱条件， 偶联后通过半胱氨酸上的巯基封闭剩余未偶联上蛋白的碘乙酸位点
1ml微球上的strep-tag II结合位点约为1.8×10^17个，1ml填料中的微球颗粒数约为1×10^6。
这个是HABA和配体结合，可以平衡后直接上样，strep标签蛋白会将HABA竞争下来
配基蛋白 Strep-Tactin 的分子量约 15 kDa。
咪唑特别适用于 pH 6.2-7.8 范围内的缓冲液。
用于洗脱含多聚组氨酸的蛋白或多肽。
溶于水。一般用于his标签蛋白纯化的洗脱试剂，建议按纯化介质说明书现配现用。
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；判断是样品本身表达的问题，还是未结合或未洗脱下来。
样品中含有其他 His 标签蛋白：通过调节 pH 值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
镍离子脱落或者剥离，按照填料再生的操作重新挂镍离子。
指的是填料的体积，不包括保护液的。
1.柱子在清洗平衡步骤流速减慢，柱子下筛板堵塞或者是试剂中有杂质堵塞。2.上样过程中流速逐渐降低，样品中有不溶物 堵塞填料或者是样品粘稠。少数情况蛋白挂柱后 流速也会减慢。 3.洗杂洗脱步骤流速减慢，蛋白不稳定 在柱子上沉淀，可以选择低温条件纯化，或者是在整个纯化过程中样品试剂中加入甘油保护蛋白。
指的是5-10倍的填料体积。
缓冲液中含有DTT 等还原剂，适当降低还原剂 DTT 的浓度，或改用巯基乙醇。
可能是蛋白不稳定析出，建议在可4度下进行上样或样品中加入少量甘油。
可能是洗杂不彻底：建议增加Wash Buffer 体积；