Case Studies干细胞&小分子化合物 | 肾干细胞体外培养与扩增案例
—— 精准调控Wnt/FGF/BMP信号轴定向诱导肾谱系特化与干性维持
—— 精准调控Wnt/FGF/BMP信号轴定向诱导肾谱系特化与干性维持
—— 精准调控 PKC/RA/TGF-β 信号轴定向诱导胰腺谱系特化与干性维持
RNA作为实验室常研究的样本,其质量的高低会直接影响实验数据的质量。一般在RNA提取过程中无法完全避免gDNA残留,因此,在进行对RNA纯度要求较高的实验之前,通常建议对RNA样本进行DNase I处理,消化残留的gDNA。消化gDNA步骤可以在RNA提取期间、RNA提取后或者RNA反转录之前进行。需提前去除gDNA的实验一般包括:mRNA表达量分析、转录组
在生物体内,rRNA丰度高且非常保守,其对于获取生物信息研究意义不大。然而,实验过程中提取到的总RNA中有95%是人源rRNA,这些rRNA的存在可能会干扰靶标RNA的检测。因此,在RNA建库测序中,通常会先将rRNA去除。目前,rRNA的去除方式以RNA酶消法为主,其主要操作步骤与原理如下:图1. rRNA去除流程[2]本文基于《Nucleic Acids
在 mRNA 疫苗、体外转录 RNA(IVT RNA)、长链 RNA 制备等高端应用中,转录后残留的质粒 DNA 模板是影响 RNA 纯度、安全性与下游实验可靠性的关键污染物。尤其在 mRNA 疫苗研发(如 CureVac 新冠 mRNA 疫苗体系)中,必须严格去除 DNA 模板,避免残留 DNA 带来的免疫原性异常、假阳性扩增与生物安全风险。图1. 线性化
实验所用试剂清单货号产品名称19221ESMolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit 快速细胞/组织总 RNA 提取试剂盒10604ESRNAsafe Tissue Stabilizer RNAsafe动植物组织RNA稳定液—无水乙醇实验前准备漂洗液 W*(19221-E)瓶中加入标签指定量的无水乙醇冰冻组织保存在RNA
—— 靶向调控ROCK、Wnt/β-catenin信号通路实现角膜缘干细胞体外扩增与干性维持
—— 精准调控 Wnt/FGF/BMP 信号轴定向诱导肝谱系特化与干性维持
—— 靶向炎症信号通路增强造血干细胞归巢与移植潜能一、研究背景造血干细胞(Hematopoietic Stem Cells, HSCs)是造血系统的基石,具有自我更新和分化为所有血液细胞谱系的能力,是骨髓移植和基因治疗的核心细胞来源。然而,临床造血干细胞移植面临供体不足、移植后造血重建延迟等关键问题,其根本原因在于对 HSC 体内稳态调控机制的理解不足,以及
—— 精准调控 SMAD/Wnt 信号轴定向诱导神经谱系特化与干性维持一、研究背景神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)是一类具有自我更新能力并能够分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多潜能干细胞,广泛用于神经发育、神经退行性疾病以及再生医学研究。传统神经诱导体系存在效率低、稳定性差、操作复杂等问题,近年来研究表明,通过小分子精准
实验步骤1.细胞准备:将PBMC根据需求加到24孔/48孔/6孔细胞培养板(84013ES/84014ES/84011ES)或培养皿(84002ES)中,细胞密度调整为5×104-2×105/mL2.细胞培养基配制:用RPMI-1640(41402ES)加10%灭活人血清,55 μM β-巯基乙醇(52644ES),100ng/ml IL-2(90213ES
实验步骤一、人单核细胞获取1. PBMC分离①采集外周血于EDTA抗凝采血管中,将血液混匀于无菌50 mL管(83507ES)中,PBS 1:1(41403ES)稀释血液标本②取干净的50 mL管,淋巴细胞分离液(40503ES)、血液、PBS以1:1:1加入,每管15 mL分离液,用10 mL移液管,沿管壁缓缓加入上述血液稀释液至45 mL刻度处,切忌分离
一、PBMC复苏复苏冻存的PBMC,室温300g离心5min。弃去上清,使用完全培养基RPMI 1640(41402ES)(含10% FBS40132ES和1%双抗60162ES)重悬细胞,并进行细胞计数与活率检测(活率应大于95%)。二、单核细胞分选方法A:贴壁纯化法(简便,适合常规实验)1. 铺板:将分离得到的单个核细胞用含血清的完全培养基重悬,调整细胞
实验准备完全培养基配方供参考:RPMI-1640(41402ES,终浓度90%)胎牛血清(终浓度40132ES,10%)丙酮酸钠(60171ES,终浓度1x)L-谷氨酰胺(60757ES,终浓度1x)HEPES(60117ES,终浓度1x)青霉素-链霉素(60162ES,终浓度1x)β-巯基乙醇(52644ES,终浓度55μM)实验步骤一、抗体包被(实验前一
一、包被anti-human CD3 mAb以激活T细胞1. 使用无菌PBS(41403ES)将anti-human CD3 mAb(32102ES)稀释至工作浓度(5 µg/mL)。2. 将稀释后的anti-human CD3 mAb按每孔1mL加入24孔细胞培养板中包被,在37°C条件下孵育2小时,或在4°C下孵育过夜。二、接种细胞并启动Th17极化1、
实验原理THP-1细胞为悬浮生长的人单核细胞系,PMA可激活蛋白激酶C(PKC)信号通路,促使其周期停滞、表达黏附分子,分化为贴壁生长的M0型巨噬细胞(具备巨噬细胞基础表型与功能)。后续通过不同细胞因子微环境调控极化方向:LPS(脂多糖)联合IFN-γ可激活NF-κB通路,诱导M0向促炎的M1型极化,高表达促炎因子与CD86等标志物;IL-4联合IL-13可
一、破骨细胞前体细胞接种1. 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清(40132ES)的α-MEM完全培养基重悬,并进行细胞计数。2. 将细胞以2.5×10³cells/mL的密度,接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中,每孔加入1 mL细胞悬液。3. 将培养板置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中静置培养18小时,使细胞充分贴壁
实验步骤一、M1极化1.接种:6孔细胞培养板(84011ES),每孔2×105个细胞(细胞不宜过多,否则影响极化效果),37°C,5% CO₂培养24h,让其充分贴壁。2.M1型诱导:将培养基更换为DMEM(41401ES)+2%FBS(40132ES)(减少血清中细胞因子的影响),并加入重组小鼠IFN-γ(91212ES,25 ng/mL)和LPS(607
实验准备完全培养基配方供参考:RPMI-1640(41402ES,终浓度90%)胎牛血清(终浓度40132ES,10%)丙酮酸钠(60171ES,终浓度1x)L-谷氨酰胺(60757ES,终浓度1x)HEPES(60117ES,终浓度1x)青霉素-链霉素(60162ES,终浓度1x)β-巯基乙醇(52644ES,终浓度55μM)实验步骤-抗小鼠CD3单克隆抗
一. 实验原理流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)的核心原理是利用流式细胞仪对快速直线流动的单个细胞或颗粒进行多参数、高通量的定量分析及物理分选。当单个细胞逐一通过激光检测区时,仪器会为每个细胞获取三类核心参数:前向散射光(FSC,指示细胞大小)、侧向散射光(SSC,反映细胞颗粒度或复杂度),以及由特定标记(如抗体或染料)发出的荧光信号。该技术