Case Studies脓毒症小鼠模型中巨噬细胞清除与重建方案
巨噬细胞是参与广泛生理和病理过程的关键先天免疫细胞。使用氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞通常用于研究小鼠体内巨噬细胞的功能。在此,我们描述了一种方案,该方案结合了对常驻巨噬细胞的清除,以及在实验性脓毒症模型背景下,用体外分化、慢病毒转导的骨髓源性巨噬细胞(BMDMs)对小鼠进行重建。该实验策略可灵活应用于其他实验方案。实验方案1. L929条件培养基的准备+L92
巨噬细胞是参与广泛生理和病理过程的关键先天免疫细胞。使用氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞通常用于研究小鼠体内巨噬细胞的功能。在此,我们描述了一种方案,该方案结合了对常驻巨噬细胞的清除,以及在实验性脓毒症模型背景下,用体外分化、慢病毒转导的骨髓源性巨噬细胞(BMDMs)对小鼠进行重建。该实验策略可灵活应用于其他实验方案。实验方案1. L929条件培养基的准备+L92
实验所用试剂设备清单货号产品名称19292ESMolPure® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物 RNA提取试剂盒—β-巯基乙醇—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,RNase-free离心管,β-巯基乙醇、无水乙醇等。2.首次使用前,在1 mL裂解液LB*中加入20 μL β-巯基乙醇。3.首次使用前
实验所用试剂设备清单货号产品名称19301ES50MolPure® Bacterial RNAKit 细菌RNA提取试剂盒10402ES溶菌酶—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,1.5 mL RNase-free 离心管,无水乙醇等。2.首次使用前,在漂洗液W*瓶中加入4倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。如
实验所用试剂设备清单货号产品名称18801ESMolPure® PlantPlusDNAKit 多糖多酚植物DNA提取试剂盒10406ESRNase A19203ESRNA Extraction buffer RNA提取辅助试剂(完美替代氯仿)—β-巯基乙醇—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,β-巯基乙醇、无水乙醇、氯
实验所用试剂设备清单货号产品名称18801ESMolPure® PlantPlusDNAKit 多糖多酚植物DNA提取试剂盒10406ESRNase A—β-巯基乙醇—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,β-巯基乙醇、无水乙醇、氯仿或氯仿替代物(19203ES),液氮(组织研磨用),1.5 mL离心管等。2.所有的离心步
实验所用试剂设备清单货号产品名称18800ESMolPure® Plant DNAKit 植物DNA提取试剂盒—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,100%乙醇,液氮(组织研磨用),1.5 mL离心管等。2.所有的离心步骤均在室温完成,使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。3.首次使用前,在去蛋白液PL*
实验所用试剂设备清单货号产品名称19292EMolPure® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物 RNA提取试剂盒—β-巯基乙醇—无水乙醇实验前准备1.自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,RNase-free离心管,β-巯基乙醇、无水乙醇等。2.除特殊指明外,所有的离心步骤均在室温完成,切勿冰浴或低温离心。使用可以达到12,0
实验所用试剂清单试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)细胞计数:从培养箱取出细胞,细胞悬液吹打混匀,使用细胞计数仪检测细胞活率及密度。细胞传代(直接稀释法):根据计数结果,将细胞按照5E5 cell/mL左右进行细胞传代。细胞传代(半换液法):若待传代细胞
一、 实验准备:固定液: 含 4% 多聚甲醛的 1× PBS透化液: 100%甲醇,使用前置于 -20℃ 预冷抗体稀释液: 含 0.5% BSA的 1× PBS细胞准备:悬浮细胞: 250g 离心收集细胞。贴壁细胞: 吸去培养基,用 300 µL 1x PBS 快速洗涤细胞两次。然后用胰酶消化细胞,并通过轻柔吹打使其分散为单细胞悬液,最后离心收集。二、 细胞
甘油,化学名为丙三醇(Glycerol / Glycerin),为无色、无臭、透明的黏稠液体,特点是高沸点、高黏度、强吸水性、与水任意比例互溶,在分子生物实验中,常用来做蛋白的低温保护剂、降低 PCR 引物二聚体、提高特异性或作为电泳上样缓冲液成分等。
小鼠海马神经元原代培养是研究神经元发育、轴突与树突形态、突触功能及其他多种神经元特性的重要体外模型。本文详细阐述了从小鼠胚胎海马组织(E17.5/E18.5)制备原代神经元的分步操作流程。本方案涵盖神经元培养体系制备、培养及鉴定的全部关键步骤,采用本方案获得的海马神经元,可根据不同实验目的接种于各类细胞培养皿,且可在一周内获得纯度高、分化成熟、性能稳定的神经
—— 精准调控Wnt/FGF/BMP信号轴定向诱导肾谱系特化与干性维持
—— 精准调控 PKC/RA/TGF-β 信号轴定向诱导胰腺谱系特化与干性维持
RNA作为实验室常研究的样本,其质量的高低会直接影响实验数据的质量。一般在RNA提取过程中无法完全避免gDNA残留,因此,在进行对RNA纯度要求较高的实验之前,通常建议对RNA样本进行DNase I处理,消化残留的gDNA。消化gDNA步骤可以在RNA提取期间、RNA提取后或者RNA反转录之前进行。需提前去除gDNA的实验一般包括:mRNA表达量分析、转录组
在生物体内,rRNA丰度高且非常保守,其对于获取生物信息研究意义不大。然而,实验过程中提取到的总RNA中有95%是人源rRNA,这些rRNA的存在可能会干扰靶标RNA的检测。因此,在RNA建库测序中,通常会先将rRNA去除。目前,rRNA的去除方式以RNA酶消法为主,其主要操作步骤与原理如下:图1. rRNA去除流程[2]本文基于《Nucleic Acids
在 mRNA 疫苗、体外转录 RNA(IVT RNA)、长链 RNA 制备等高端应用中,转录后残留的质粒 DNA 模板是影响 RNA 纯度、安全性与下游实验可靠性的关键污染物。尤其在 mRNA 疫苗研发(如 CureVac 新冠 mRNA 疫苗体系)中,必须严格去除 DNA 模板,避免残留 DNA 带来的免疫原性异常、假阳性扩增与生物安全风险。图1. 线性化
实验所用试剂清单货号产品名称19221ESMolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit 快速细胞/组织总 RNA 提取试剂盒10604ESRNAsafe Tissue Stabilizer RNAsafe动植物组织RNA稳定液—无水乙醇实验前准备漂洗液 W*(19221-E)瓶中加入标签指定量的无水乙醇冰冻组织保存在RNA
—— 靶向调控ROCK、Wnt/β-catenin信号通路实现角膜缘干细胞体外扩增与干性维持
—— 精准调控 Wnt/FGF/BMP 信号轴定向诱导肝谱系特化与干性维持