应用案例离心柱法 | 桑叶DNA提取

实验所用试剂设备清单

实验前准备

1．自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，100%乙醇，液氮（组织研磨用），1.5 mL离心管等。

2．所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3．首次使用前，在去蛋白液PL*（18800-F）和漂洗液W*（18800-G）瓶中加入2倍体积和4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。

操作步骤

1．加入400 µL裂解液LB和4 µL RNaseA(10mg/mL)至1.5 mL离心管中，混匀后室温备用。

2．取50 mg 湿重桑叶，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至上述1.5 mL的离心管中。涡旋振荡混匀，瞬离收集管壁液体。

3．置于65℃温浴10 min，每2-3 min颠倒混匀样品2-3次。

4．加入130 µL结合液BD，充分混匀，置于冰上5 min。

5．12,000 rpm离心10 min。转移上清至新的1.5 mL离心管中。

6．取500 µL上清，加入750 µL去蛋白液PL*，立即吹打混匀。

7．将DNA吸附柱P1套入2 mL收集管中，备用。

8．将上述样本预处理液（含沉淀）加入DNA吸附柱P1中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

9．将DNA吸附柱P1放回收集管中，加入600 µL漂洗液W*，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。重复一遍步骤10。

10．将DNA吸附柱P1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W*。

11．将DNA吸附柱P1放入新的1.5 mL离心管中，在DNA吸附柱P1中央加入100 µL洗脱液，室温放置5 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为DNA溶液。

质检结果—DNA浓度和纯度

质检结果—DNA完整度分析

数据来源：杭州某高校老师

实验结论

采用翌圣生物离心柱法植物DNA提取试剂盒（18800ES）提取8个桑叶样本（样本投入50mg湿重，较少，后续可以投入100 mg湿重），通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的桑叶DNA浓度较高，纯度较好，能够满足后续NGS DNA建库的需求。