应用案例小鼠冰冻心脏组织RNA提取案例

实验所用试剂清单

实验前准备

• 漂洗液 W*（19221-E）瓶中加入标签指定量的无水乙醇
• 冰冻组织保存在RNAsafe中：从RNAsafe中取出组织，然后快速用干净的吸水纸吸掉表面液体。之后立即置于 500 μL 裂解液 LB中匀浆。

操作步骤

1. 将处理好的匀浆液加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上(柱子放在 2 mL 收集管内)，13,000 rpm 离心 1 min，收集含有 RNA 的滤液（gDNA在柱上，RNA在滤液中）。

2. 向滤液中加入0.5倍滤液体积的无水乙醇（约250 μL），移液器吹打混匀。

【注】：若加乙醇后出现浑浊或有絮状物产生，属正常现象，立即吹打混匀，不要离心。

3. 将上述混合液全部加入新的 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液（此步RNA吸附在柱上）。

4. 加入 700 μL 去蛋白液，室温 30 s，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管中。

5. 加入 500 µL 漂洗液 W*(请先确认已加入无水乙醇!)，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液。

6. 重复一遍步骤 5，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管内。

7. 空柱 13,000 rpm 离心 2 min，除去残留漂洗液 W*。

8. 将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱放入新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，在膜中央加入 50 µL RNase-free H2O，室温放置 1 min，然后 13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液，即为 RNA 溶液。

采用Agilent2100质检

数据来源：美国某高校老师

实验结论

采用翌圣生物MolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit （19221ES）提取2个冰冻的小鼠心脏组织，并且心脏组织采用RNAsafe Tissue Stabilizer RNAsafe（10604ES）浸透，通过Agilent2100质检检测RNA的浓度和RNA的完整度，结果显示：提取的RNA浓度高，RIN ≥8.0，28S峰形和18S峰形完整且≈2：1。

说明：

1、MolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit（19221ES)对RNA提取的完整度很好；

2、RNAsafe 有助于在组织解冻时，保护RNA不被降解。