应用案例基于MGISP-960自动化平台的水稻叶片DNA文库构建方法

流程分类

流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载）

1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加

① 加入样本，样本投入量：200 ng （人工）；

② 进行片段化，片段程序选择35℃-15min。

2 接头连接

提前将接头从10 μM稀释到5 μM（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。

3 连接产物纯化和分选

① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×；

② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.62×，分选2磁珠比例：0.15x。

4 文库扩增

将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6 cc。

5 扩增产物纯化

对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。

6 建库结束

建库结束，弹窗提醒人工取走文库。

物种

Qubit浓度（ng/μL)

文库体积（μL）

总产量（ng）

水稻A

43

25

1075

水稻B

37.8

25

945

水稻C

38.4

25

960

水稻D

37

25

925

水稻E

42

25

1050

水稻F

38.8

25

970

水稻G

33.8

25

845

水稻H

39.6

25

990

应用

产品货号

产品名称

RNA建库

12972ES

Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4

接头

13350ES

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1）

纯化磁珠

12601ES

Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠

自动化耗材

83560ES

0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款）

83672ES

96孔深孔板，U底（1.3 mL)

83130ES

250 μL盒装滤芯透明无菌吸头

83624ES

荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板

文库浓度测定

12642ES

1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂

83509ES

Qubit专用检测管

80571ES

核酸定量仪荧光计Qubit（单通道）

文库条带大小检测

10516ES

GoldBand 100 bp plus DNA Ladder

10202ES

YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）

10208ES

Agarose琼脂糖

60161ES

1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L