应用方向碘克沙醇（Iodixanol）——多领域优选的密度梯度介质

碘克沙醇(Iodixanol)是一种非离子亲水性化合物，起初作为造影剂开发，常用于冠状动脉造影术中的造影剂，成人/儿童心血管造影、脑血管造影、外周动脉造影、腹部血管造影、尿路造影以及CT增强检查等。除了用作造影剂，碘克沙醇还可广泛应用于各类分离纯化实验，适用于大分子、哺乳动物和非哺乳动物细胞、亚细胞器/膜、病毒、血浆脂蛋白、外泌体的分离纯化，包含DNA、细胞因子、溶酶体、内质网、过氧化物酶体、T淋巴细胞和自然杀伤细胞等样本类型。

我司提供两种形式的碘克沙醇

碘克沙醇溶液利用不同颗粒之间存在沉降系数差异，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，会在密度梯度区域上形成不同区带，从而达到纯化的目的。目前常见的病毒纯化方法是碘克沙醇密度梯度超速离心法和CsCl/蔗糖密度梯度超速离心法。

相较于CsCl/蔗糖溶液的繁琐配制和高渗透性，碘克沙醇溶液的优势在于：

1.无需额外灭菌处理且无需在细胞感染前去除。

2.溶液低粘度，离心时间短，实验过程简单易操作。

3.非离子型，无毒，内毒素<0.13 EU/mL，代谢惰性。

4.在所有有效密度下皆为等渗溶液。

具体参考方法如下：

样本4000 ×g离心20分钟，获得澄清的细胞裂解液。

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制备不同浓度梯度的碘克沙醇，从管底向上依次加入稀释好的60%(w/v)、40%(w/v)、25%(w/v)、15%(w/v)碘克沙醇溶液。（15%(w/v)碘克沙醇加入1 M NaCI可防止rAAV与细胞裂解液中蛋白质聚集）

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小心依次加入到离心管中，最上面加入适量细胞裂解液。

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18°C，350,000 ×g离心1 h

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图1. AAV病毒经碘克沙醇密度梯度超速离心纯化后的示意图

外泌体是含有丰富活性物质的细胞分泌的一种微小囊泡，在细胞间通讯中具有重要作用。为了深入研究外泌体的功能和作用机制，需要对其成分进行分离和纯化。密度梯度离心法是一种常用的外泌体分离纯化方法。密度梯度离心是根据外泌体与杂质粒子之间的密度差异在超离的基础上进行改进的分离方法，主要针对一些杂蛋白含量高且通过超离无法得到高纯度外泌体的样本。

具体参考方法如下：

将细胞培养上清液通过滤膜过滤，去除杂质和细胞碎片

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制备不同浓度梯度的碘克沙醇，从管底向上依次加入稀释好的40%(w/v)、20%(w/v)、10%(w/v)、5%(w/v)碘克沙醇溶液

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将过滤后的上清液（外泌体溶液）加到离心管中梯度的顶部，4℃, 100, 000×g离心18 h

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离心后，可见管内形成密度梯度，从下至上分别为高密度物质、低密度物质、上清液。使用吸管小心地将上清液和低密度物质去除，保留高密度物质。（高密度物质即为外泌体）

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将高密度物质溶解在适量的缓冲液中（如PBS），再次进行超速离心（4℃, 100, 000×g），去除未分离的杂质

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重复以上步骤离心，直至获得高纯度的外泌体

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小鼠小胶质细胞是中枢神经系统中固有且核心的免疫细胞，在神经微环境稳态维持、免疫防御及神经损伤修复中发挥关键作用。为了深入研究小鼠小胶质细胞的生物学功能、活化机制及与神经疾病的关联，需要对其进行高效的分离和纯化。密度梯度离心是根据小鼠小胶质细胞与脑组织中其他细胞、细胞碎片之间的密度差异在离心的基础上进行改进的分离方法，是常用的小鼠小胶质细胞分离纯化方法。

具体参考方法如下：

制备16%（w/v）和36%（w/v）的碘克砂醇溶液

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取脑组织样本，加入0.25% trypsin和0.1 mg/mL DNase I室温孵育20 min后过滤

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用HBSS稀释细胞悬液，1500×g离心，5 min，弃上清

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加入36%（w/v）的碘克砂醇溶液重悬细胞沉淀

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加入取等体积的16%（w/v）碘克砂醇溶液

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670×g离心，20 min

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肝脏/胰腺星状细胞分别是肝、胰腺组织中关键的间质功能细胞，均兼具生理稳态维持与病理调控双重核心作用。肝脏星状细胞定位于肝脏Disse间隙，主导肝纤维化进程，同时参与肝脏脂质代谢、损伤修复与免疫调控；胰腺星状细胞分布于胰腺腺泡与导管周围，是胰腺纤维化的核心驱动细胞，还调控胰腺炎症反应与肿瘤微环境形成。二者均为肝、胰腺疾病机制研究与靶点开发的核心研究对象，高效的分离纯化是其功能研究的关键前提。

使用胶原酶（胰腺还需加入Pronase）消化组织并过滤

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使用HBSS/GBSS洗涤细胞1-2次

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制备15%（w/v）(ρ=1.084 g/mL)和8.0-11.5% (w/v) (ρ=1.050-1.065 g/mL)碘克沙醇溶液

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使用15%（w/v）碘克沙醇溶液重悬最终洗涤的细胞沉淀

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从管底向上依次加入：细胞悬液、8.0-11.5% (w/v)碘克沙醇溶液和HBSS/GBSS

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1400 ×g离⼼15-20 min

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参考文献：

[1]Tsuchiya, T., Park, K.C., Toyonaga, S., et al.Characterization of microglia induced from mouse embryonic stem cells and their migration into the brain parenchyma. Journal of Neuroimmunology.2025; 160(1-2): 210-218.DOI:10.1016/j.jneuroim.2004.10.025

[2]Brouwer, A., Hendricks, H. F. J., Ford, T., et al. Centrifugation separations of mammalian cells. Preparative Centrifugation–A Practical Approach.1992; 271-314.

[3]Shek, F. W-T., Benyon, R. C., Walker, F. M., et al. Expression of transforming growth factor-ß1 by pancreatic stellate cells and its implications for matrix secretion and turnover in chronic pancreatitis. American Journal of Pathology. 2002;160(5): 1787-1798. DOI: 10.1016/s0002-9440(10)61125-x