Case Studies血管生成实验案例四：皖南医学院(HUVEC细胞饥饿处理)

实验所用产品

一、实验前准备与基质胶铺板

基质胶解冻：实验前，将Ceturegel®基质胶放置于装有碎冰的冰盒中，于4℃冰箱过夜解冻。

全程低温操作：实验开始前约1小时，将24孔板和枪头预冷。所有涉及基质胶的步骤在冰上进行。

铺板与聚合：使用预冷的枪头，向24孔板每孔中加入 200µL 预冷的、原浓度未稀释的基质胶原液。用枪头的尖端轻轻将胶摊平，覆盖孔底中心区域。将铺胶后的24孔板转移至37℃培养箱中，静置 45-60分钟，使其完全凝固成凝胶。

二、HUVEC细胞准备（饥饿处理）与接种

细胞预培养与饥饿同步化：将HUVEC细胞接种于6孔板中，培养24小时。弃去原培养基，更换为无血清基础培养基，继续培养 12小时，使细胞周期同步化于G0/G1期，并增强其对后续成管信号的响应。

细胞消化与重悬：饥饿处理结束后，消化6孔板中的细胞，离心后获得细胞沉淀。用ECM完全培养基重悬细胞，并进行精确计数。

细胞接种：待24孔板中的基质胶凝固后，小心吸弃孔内可能存在的液体。

调整细胞密度，以每孔 500 µL ECM培养基的体积，接种 1.5×10⁵个 细胞（即15万细胞/孔）于凝胶表面。

轻轻晃动孔板使细胞分布均匀。

三、培养、观察与表型记录

孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。

观察时间点选择与记录：根据实验目的，在接种后的 4小时、8小时、12小时及24小时 等关键时间点，使用倒置显微镜进行观察。应系统记录不同时间点下细胞的形态变化。

图1：4h培养情况	图2：4h培养情况

（数据来源：皖南医学院）

血管生成实验小贴士

细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；

基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；

观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。