试剂用无内毒素水,容器进行去内毒素处理,或者选择不含内毒素的耗材。
可以。PBS(pH 7.4)兼容该内毒素去除树脂,可直接作为平衡缓冲液使用;若样品对磷酸盐敏感,可改用上述 HEPES 或 Tris 缓冲液,体系灵活但都不影响内毒素吸附效率。
容量是 1ml。重力柱一般装填量,最少空柱体积的1/10,一般空柱体积的1/2。
高度55mm;内径5.6mm.
容量是3 ml。重力柱一般装填量,最少空柱体积的1/10,一般空柱体积的1/2。
高度63 mm;内径8.9 mm.
容量是5 ml。重力柱一般装填量,最少空柱体积的1/10,一般空柱体积的1/2。
高度66 mm;内径12.7 mm.
容量是12 ml。重力柱一般装填量,最少空柱体积的1/10,一般空柱体积的1/2。
高度83mm;内径15.6mm.
容量是30 ml。重力柱一般装填量,最少空柱体积的1/10,一般空柱体积的1/2。
高度101 mm;内径22.5 mm.
适用于各种亲和层析介质的装填。可直接连接 Akata 等蛋白纯化仪使用,也可通过鲁尔接头搭配注射器进行手动纯化或搭配蠕动泵使用。
本品为中低压层析空柱,规格为 1 mL。
先跑胶确定蛋白是未结合还是未洗脱,通过对比纯化样品、流穿液、洗脱液的目的蛋白条带确定。如果是未结合:1、可能是样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂;建议样品透析或用结合buffer 稀释。2、可能是标签聚集,可以加入1mM的DTT改善此情况。
1、可以先尝试下在洗杂步骤提高盐浓度或者洗杂buffer中加入终浓度0.1%非离子型去污剂。2、可能是目的蛋白降解;可以WB验证,建议加一些蛋白酶抑制剂,如 PMSF等。
不能剧烈摇晃,会破坏高度交联的 6%琼脂糖微球;使用前可轻轻充分颠倒若干次, 使琼脂糖珠混合均匀。
具体使用次数与样品有关,可以耐受0.1 M氢氧化钠清洗5次后载量仍有80%以上。
1)根据纯化的样品量,取适量填料加入离心管中,1000 rpm 离心 1 min,吸弃上清;2)向离心管中加入5 倍介质体积的平衡液清洗介质,1000 rpm 离心1 min,吸弃上清,重复两次以上。3)加入样品,封闭离心管,4℃振荡孵育 2-4 h 或者37度孵育30 min-2h。4)孵育结束后…
洗脱结束后可以用较高浓度(20-50mM)的麦芽糖进行一次较为彻底的洗脱,然后用中性缓冲液冲洗,清洗后保存在20%乙醇 1XPBS中,保存温度2-8℃。如果使用氢氧化钠清洗的话,后续是需要用中性缓冲液例如PBS冲洗至ph中性,只使用纯水冲洗的话无法达到中和ph的效果,可能会有微量氢氧化钠残留在填料上…