减少杂质以防阻塞柱子。
蛋白纯化FAQ
最好不要，可轻轻搅拌填料或者敲打层析柱以排除气泡。
由于盐酸胍的带电性强，会中和 SDS 的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS 作为透析液，透析两次，每次 1 小时，透析液的体积可控制在样本的 100 倍）。
一般用 2 倍柱体积的 0.1 M NaOH 或 6 M 盐酸胍或 8 M 尿素溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS，pH 7.4 清洗，来去除一些沉淀或变形物质；用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS…
主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来。纯化亚氨基生物素标签蛋白可以在非变性的条件下洗脱。
1)根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm离心1min，吸弃上清；向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm离心1min，吸弃上清; 重复两次以上。加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育2-4 h或者37℃孵育30 min-2 h。孵育结束后，1000 rpm离心1…
推荐流速 1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
链霉亲和素。
根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。
不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。
主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。
推荐流速 1 -5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率， 收集流出液，待检测。
链霉亲和素。
根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。
不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。
主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。
若蛋白发生聚集，建议在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如 0.1%Triton X-100 或 Tween-20。
具体上样量要参考填料的载量， 该产品的载量为＞ 40 mg 6 × His-tagged protein/mL 基质。
所用水和 Buffer 在使用前最好用 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤除菌。
可以重复使用。重复使用次数和样品和使用情况有关，一般可重复10 次左右。