可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；判断是样品本身表达的问题，还是未结合或未洗脱下来。
蛋白纯化FAQ
填料规格指的是填料的体积，不包含保护液的体积
磁珠上的配体跑还原电泳分子量在15kd。
这个一般不洗脱，是用于后续实验的。
可以尝试80℃加热2-5min进行洗脱。
会影响，不能冷冻。
可以封闭；为了避免额外的蛋白引入，我们一般是用1M乙醇胺或者1M Tris进行封闭。
缓冲液成分是：10mM Tris-Cl (pH 7.5), 1mM EDTA (pH 7.5), 0.1% (m/V) SDS。
结合生物素的载量约为700pmol/mg。
可以在洗杂缓冲液中加0.5%的Tween-20 ，并补加氯化钠0.15-0.2M，清洗磁珠过程可以加入buffer 悬浮混合2-3min，洗杂过程有更换EP管。
变性洗脱得到的是抗体-抗体复合物；蛋白是直接偶联到磁珠上，变性洗脱条件不会把A/G洗下来。
如果已经构建好非E.coli体系的质粒，需做密码子优化即可。
若针对抗体亲和性及酶活性检测，可不经纯化直接用于测试；若实验对蛋白纯度有明确要求，或需开展细胞水平实验，则需参照常规蛋白表达产物的纯化流程进行后续处理。
不带，我们的质粒做双酶切的时候会把质粒上的his标签序列切掉，如果需要目的蛋白带标签，需在目的基因上加上所需的标签序列。
线性模板上已预置His标签编码序列，最终表达的目的蛋白会携带His标签，无需在目的基因上额外添加标签序列。
可以。若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
可以。直接在磁珠中加loading煮球离心取上清跑胶即可
一般磁珠的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为：20ul磁珠混悬液+5ug抗体+总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育
参照下表蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
不建议重复使用。