不能,-20℃保存。
一般要根据具体实验做预实验,自己摸索。
推荐反应缓冲是 50 mM 磷酸钠,150 mM NaCl(pH6.6),多数常见的生物缓冲也适用,比如 Tris 或 PBS。但推荐反应缓冲是 50 mM 磷酸钠,150 mM NaC(l多数常见的生物缓冲也适用,比如 Tris 或PBS。pH6.6),
该酶的分子量是110KDa.
该酶储存液的配方是PBS PH 7.4,50% glycerin。
本品是从牛的血浆纯化制得,具有纯度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、灭活病毒、生产稳定性好等特点。
我们的凝血酶没有每毫克干粉的活性指标,说明书的的比活度指的是产品中每毫克蛋白质含有的凝血酶活性。
建议凝血酶母液用生理盐水配制,切割时的缓冲液最好加入0.9%的氯化钠,可以在4℃切割24小时。建议加入等量的消化缓冲液(推荐20mM Tris-HCl缓冲液,含150mM 氯化钠,pH8.0)
如果在4℃切割不明显,可以尝试在37℃进行切割实验,每2小时补加适量的凝血酶,看看是否能有效切割。
用我们实验室的融合蛋白,每1mg融合蛋白加凝血酶5U,反应缓冲体系为20mM Tris-HCl 含0.15M 氯化钠,pH7.8,比较37℃和4℃的切割效果,反应时间4小时,两种温度条件下均可实现基本完全切割,在1小时和2小时,37℃切割效果明显较4℃好。4小时后两者差别不明显。
我们的凝血酶每1 KU中约含有凝血酶蛋白质0.5 mg,凝血酶1KU每支中干粉质量约30 mg,大部分为辅料。
一般建议一次用完。凝血酶产品为冻干粉末,溶解时,建议每支凝血酶加0.9%氯化钠溶液1~2 ml复溶,制成浓溶液,该浓溶液在-20℃以下保存,6个月内活性变化不显著,但应避免反复冻融。临用前,再用工作液稀释至终浓度。一般应避免使用纯水溶解和稀释,在纯水中凝血酶容易发生变性失活。
一般磷酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液都是可以的。
产品在常温下放置一周以内影响不大。
凝血酶可从切割产物中用苯甲脒或肝素琼脂糖亲和纯化移去。
据文献报道牛凝血酶的 PI是7.05。
该产品来源于大肠杆菌经过Ni 柱亲和纯化而来。
重组型 TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然 TEV 酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
该产品16-30℃下反应 3-3.5h 最好。