镍离子脱落或者剥离，按照填料再生的操作重新挂镍离子。
蛋白免疫产品技术咨询FAQ
指的是填料的体积，不包括保护液的。
1.柱子在清洗平衡步骤流速减慢，柱子下筛板堵塞或者是试剂中有杂质堵塞。2.上样过程中流速逐渐降低，样品中有不溶物 堵塞填料或者是样品粘稠。少数情况蛋白挂柱后 流速也会减慢。 3.洗杂洗脱步骤流速减慢，蛋白不稳定 在柱子上沉淀，可以选择低温条件纯化，或者是在整个纯化过程中样品试剂中加入甘油保护蛋白。
指的是5-10倍的填料体积。
缓冲液中含有DTT 等还原剂，适当降低还原剂 DTT 的浓度，或改用巯基乙醇。
可能是蛋白不稳定析出，建议在可4度下进行上样或样品中加入少量甘油。
可能是洗杂不彻底：建议增加Wash Buffer 体积；
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；若是目的蛋白结合比较弱，可以降低裂解液中的咪唑浓度，调PH到8。
含 20%乙醇的 1×PBS。
>40 mg 6×His-tagged protein/mL 基质。
不能。建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤后上柱使用。
这个没有统一标准，具体浓度需要自己在实验中探索。
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；若是本身样品中表达量太低，建议优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系。
是的，是从牛血中提取的。
纤维蛋白原冻干粉组分表（100mg）纤维蛋白原：66mg甘露醇：12mg三羟甲基氨基甲烷：6mg氯化钠：16mg
我们的纤维蛋白原含有纤溶酶原，不过建议测定尿激酶活性时再加入适量的纤溶酶原。
会有明显的不溶物，可以离心（3000rpm，室温，10分钟）取上清液。浓度越高不溶物越多，建议离心取上清使用。不建议用过滤方法去除不溶物，纤维蛋白原溶液不好过滤。溶解时，可将纤维蛋白原粉末加入生理盐水中，在37℃左右，间断搅拌溶解30min，75mg纤维蛋白原，加生理盐水50ml溶解，浓度为1.5m…
使用脱硫生物素作为洗脱液，1 mM HABA或0.1M氢氧化钠再生10次左右。
可以用，但是用D-生物素洗脱后必须用高浓度氢氧化钠再生，重复使用时载量会明显变低。所以如果填料需要重复使用就必须用脱硫生物素洗脱。
我们产品属于第二代。第三代填料的洗脱液可用D-生物素，能在低浓度生物素或者变性等特殊条件下结合Strep标签蛋白，再生方法可用氢氧化钠再生且重复使用效果较好。第三代货号是20795ES 。