可能是细胞破碎过度，建议减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1 倍 10 mg/mL 溶菌酶，25 mM Tris-HCl，pH 8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与 GST 融合目的蛋白的共纯化。
过度的裂解使目的蛋白变性，建议使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
可能是洗脱液中谷胱甘肽浓度太低，建议增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50 mM Tris-HCl，20-40 mM 还原型谷胱甘肽pH 8.0 洗脱。
可能是抗体与E. coli 的各种反应，建议抗体吸附E. coli 蛋白：GST-抗体；超声处理去除 GST 抗体，可以用 Western Blot 检测。
可能是目的蛋白聚集产生沉淀，建议在细胞裂解前溶液中加入 DTT，终浓度为 1-10 mM。
可能是Mr 70000 蛋白与目的蛋白一起纯化下来。Mr 70000 蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK 的产物，建议可以在目的蛋白中加入 50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4 在 37℃加热 10min 去除。
可能是非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱，建议在洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如 0.1%的 Triton X-100 或者 2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷 Tween-20。
50 mM Tris，5 mM EDTA-Na，50 mM L-半胱氨酸，pH 8.5。
可能是筛板被堵塞，建议清洗或更换筛板。
可能是蛋白或多肽不溶，建议偶联液中加入＜30%的 DMSO 或DMF 或 6 M 盐酸胍促进样品溶解。
可能是树脂没有彻底清洗，建议增加结合/洗杂液体积。
偶联原理如图，偶联液的要求是中性偏碱条件， 偶联后通过半胱氨酸上的巯基封闭剩余未偶联上蛋白的碘乙酸位点
1ml微球上的strep-tag II结合位点约为1.8×10^17个，1ml填料中的微球颗粒数约为1×10^6。
这个是HABA和配体结合，可以平衡后直接上样，strep标签蛋白会将HABA竞争下来
配基蛋白 Strep-Tactin 的分子量约 15 kDa。
咪唑特别适用于 pH 6.2-7.8 范围内的缓冲液。
用于洗脱含多聚组氨酸的蛋白或多肽。
溶于水。一般用于his标签蛋白纯化的洗脱试剂，建议按纯化介质说明书现配现用。
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；判断是样品本身表达的问题，还是未结合或未洗脱下来。
样品中含有其他 His 标签蛋白：通过调节 pH 值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。