蛋白免疫产品技术咨询FAQ

1)根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm离心1min，吸弃上清；向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm离心1min，吸弃上清; 重复两次以上。加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育2-4 h或者37℃孵育30 min-2 h。孵育结束后，1000 rpm离心1…

推荐流速 1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。

链霉亲和素。

根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。

不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。

推荐流速 1 -5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率， 收集流出液，待检测。

链霉亲和素。

根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。

不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。

若蛋白发生聚集，建议在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如 0.1%Triton X-100 或 Tween-20。

具体上样量要参考填料的载量， 该产品的载量为＞ 40 mg 6 × His-tagged protein/mL 基质。

所用水和 Buffer 在使用前最好用 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤除菌。

可以重复使用。重复使用次数和样品和使用情况有关，一般可重复10 次左右。

>20 mg GST protein/mL 基质（40 kDa）。

可以调整下洗杂的缓冲液，1.补加氯化钠浓度至0.5M左右，PBS溶液中氯化钠含量约0.15M，可以再补加0.35M左右。 2. PBS中添加终浓度0.1-0.2%Tween-20，通过去污剂作用减少蛋白非特异性吸附。 3. 洗杂步骤可以在清洗2-3次后将填料转移至新的EP管中继续清洗。

本品谷胱甘肽纯化树脂由琼脂糖微球构成，若干次颠倒可使琼脂糖珠混合均匀。

尽量避免，最好在 4℃或者冰上操作。

可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；先判断是样品中本身表达量低，还是未结合填料或者是未被洗脱下来。