投入量依据样本类型而定。细胞上清样本,推荐约 1×10¹¹ 颗粒;样本纯度较高时,1×10¹⁰颗粒也可。血液样本,至少需要 1×10¹¹~1×10¹² 颗粒。
建议保存于 -80℃。提取后的外泌体在 -20℃ 短期(1-3 天)可保持基本性状,但超过一周后粒径分布和数量会明显下降;-80℃ 长期保存可有效维持外泌体完整性。建议分装保存、避免反复冻融。
沉淀法(如 PEG 沉淀、聚合物沉淀)对染色后的外泌体本身无明显影响。操作建议保持 4℃ 低温、离心转速不超过 12,000×g、动作温和,避免剧烈涡旋。如对外泌体完整性要求更高,可改用超滤管法。
主流方法包括:①差速超速离心——金标准,纯度高但设备要求高;②聚合物沉淀法(PEG/共沉淀)——操作简便、适合常规研究;③尺寸排阻色谱(SEC)——保留天然状态好;④超滤/过滤柱——快速去除大颗粒杂质。各方法在得率、纯度与完整性上各有取舍,可据下游实验选择。
提取后的外泌体建议用 PBS 重悬后 -80℃ 分装保存,避免反复冻融(冻融不超过 2 次);短期 4℃ 可暂存。运输采用干冰冷链;到货后立即 -80℃ 冻存。
常规鉴定包括:①粒径与浓度——NTA 或纳米流式;②标志物蛋白——WB 或 ELISA 检测 CD9、CD63、CD81 及阴性标志物(如 Calnexin);③形态——电镜观察杯状/碟状结构。具体方案可结合研究目的设计。
具备纯化富集作用。本款外泌体纯化柱孔径为 220 nm,可截留粒径>220 nm 的大颗粒杂质(细胞碎片、蛋白聚集体等),对 30‑200 nm 范围内的外泌体实现初步纯化与浓缩。纯化柱为一次性耗材,不建议重复使用。
不需要。我们的试剂盒这一步无需添加含 1% BSA 的 PBS,是否含 1% BSA 对本试剂盒染色结果影响不大,按说明书操作即可。
可以的,对重新提取的外泌体没有上限要求,等比例添加就好。也推荐超滤管的方式。
41206是旧版,41216是新版。新版多加了除杂蛋白的试剂solution P2,除杂蛋白的效果会好很多。结果上来说,同样的样品新版提取的蛋白浓度会低一些,但是纯度会高一些。老客户一直在用41206就继续推荐41206,新客户推荐41216。两款试剂盒都是共沉淀法,做蛋白质组学推荐41216新款试…
每毫升尿液提取的外泌体蛋白量约10 μg。
0.45um的孔径
该培养基不含青链霉素(双抗),用户可根据实验需要自行添加。建议在使用前补加终浓度为100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素。若用于严格的筛选培养,需确认目标细胞对所加抗生素的敏感性。
41206是旧版,41216是新版。新版多加了除杂蛋白的试剂solution P2,除杂蛋白的效果会好很多。结果上来说,同样的样品新版提取的蛋白浓度会低一些,但是纯度会高一些。老客户一直在用41206就继续推荐41206,新客户推荐41216。两款试剂盒都是共沉淀法,做蛋白质组学推荐41216新款试…
本品滤膜材料与市面上常规超滤管基本一致,无本质区别;该产品为非无菌耗材。
本产品主要适配多数肿瘤细胞收集外泌体,暂未开展内皮细胞的相关验证,无相关实验数据。若需用于内皮细胞,建议先采购小规格培养基进行预实验评估可行性。
不可以重复使用,本产品为一次性耗材。外泌体纯化柱的树脂基质在接触样品后会发生不可逆的结合或堵塞,重复使用会导致交叉污染和纯化效率显著下降。建议单次使用后即丢弃,以保证实验结果的稳定性和可重复性。
推荐上样体积为 200 μL。实际可处理体积也受样品性质影响,上样量过大容易造成柱体堵塞,建议不要超量加载样本。
一般是≥1*109 Particles/mL,最终准确颗粒数以COA 报告标注数据为准。
这个纯化柱是未加填料的。