该系列探针是针对动物细胞开发的,对于植物或是原核生物,由于存在细胞壁因而染色较为困难不是很方便,没有做过相关验证。
细胞分析FAQ
该探针染色后应在 1h 内完成观察并拍照,过夜会导致荧光的消失,建议染色后立即进行观察以保证荧光拍照的结果。
不可以,孵育二抗必须要透化处理,而透化会破坏溶酶体的酸性环境,影响染色效果。
自噬溶酶体和正常的溶酶体在形态结构上有较大差异,该探针主要是针对常规的溶酶体染色,对于自噬溶酶体的染色效果不是很确定,可以参考一些使用过该产品发表的文献资料确定可以染色其他酸性细胞器,建议极低浓度下才能优先选择染色酸性溶酶体。
建议染色完立即检测荧光,荧光信号会随时间而逐渐减弱。
工作液是需要现配现用的,不建议保存。
可以使用荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪以及流式细胞仪,推荐使用共聚焦显微镜。
建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
-20℃避光保存,半年有效。
大致有 3 个原因:1.溶酶体探针浓度过低,建议适当增大浓度;2.染色时间过短,建议延长染色时间;3.染色完之后,放置过长时间才检测信号;建议染色完立刻检测。
大致有 3 个原因:先用多聚甲醛 乙醛等固定细胞,破坏了溶酶体的酸性环境。染色完后,又用多聚甲醛固定细胞,或者透化细胞,破坏了溶酶体的酸性环境;染色前后均不建议固定细胞;染色完到上机检测这一段时间过长,并且没有避光处理。建议避光染色,染色完立即检测荧光信号。
溶酶体探针浓度过大,建议适当降低浓度;溶酶体探针染色时间过长,建议适当缩短时间。
这四种溶酶体探针是对活细胞中的酸性区室进行染色。所以必须要在活细胞状态下染色。
固定后会破坏溶酶体的酸性环境从而会造成荧光减弱甚至消失的情况,染色前后均不建议固定。
不可以,孵育二抗必须要透化处理,而透化会破坏溶酶体的酸性环境,影响染色效果。
自噬溶酶体和正常的溶酶体在形态结构上有较大差异,该探针主要是针对常规的溶酶体染色,对于自噬溶酶体的染色效果不是很确定,可以参考一些使用过该产品发表的文献资料确定可以染色其他酸性细胞器,建议极低浓度下才能优先选择染色酸性溶酶体。
建议染色完立即检测荧光,时间过长,荧光信号会逐渐减弱。
工作液是需要现配现用的,不建议保存。
可以使用荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪以及流式细胞仪,推荐使用共聚焦显微镜。
建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。