实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后Annexin V-PE/7-AAD 双阳性比例过高,造成这种结果的原因可能是细胞本身活力低。建议用台盼蓝染色计算细胞活力,阴性对照台盼蓝拒染的细胞应大于 95%。若细胞活力低,建议重新复苏细胞,通常刚复苏的细胞至少应传代 2-3 次以后才能进行实验。另一可能…
细胞分析FAQ
可以不调补偿,通道选择如下:用488nm激发的FITC通道;7-AAD使用561nm激发的PerCP‑Cy5.5或PC5.5通道。
做肝脏巨噬细胞清除,需要做灌流。流式建议检测F4/80和CD11b。推荐尾静脉注射,24h后取肝脏,做免疫组化。免疫组化不用灌流。
这款试剂是多室脂质体。
该清除剂的Clodronate的浓度是5mg/mL。
不同批次会有差异,整体粒径<10μm,平均粒径为5-6μm。
收到氯磷酸脂质体后,如果不能马上使用,需放置在 4℃冰箱。禁止冻存!使用时作为原液使用,不能进行稀释。脂质体很容易发生沉淀,建议使用之前轻轻混匀,另外 4℃的氯磷酸脂质体不能马上使用,需要恢复到室温才能进行注射。
可以用于体外巨噬细胞的清除。
一方面有可能是动物注射了不均一的脂质体悬液。建议在使用之前轻轻摇晃混匀。脂质体在体外一段时间后会发生沉降。如果在很长一段时间内需要一次注射多只动物,那么脂质体便会在注射器中发生沉淀,形成不均一悬液,这样一来,第一只注射的计量与最后一只注射的计量就会发生明显的变化。另外一方面有可能是脂质体刚从冰箱取出…
这个要涉及到具体的实验方案设计,建议客户自行设计实验方案,可以寻找符合的文献进行参考,另外翌圣官网的产品应用中提供有部分参考文献。
这个可能是操作过程中受到细菌的污染,体内清除巨噬细胞后会增加例如病毒粒子、细菌或者酵母感染的几率。
大鼠中成熟的巨噬细胞呈现 ED1 和 ED2 双阳性,但是有一些没有吞噬功能的或者吞噬作用小的前体细胞也是 ED1+,但是呈现 ED2-。因此,所有 ED2+的细胞都可以被完全清除,但是 ED1+的细胞却只能被部分清除,清除的比率取决于前体/成熟巨噬细胞的比例。
Annexin V 是检测细胞早期凋亡,JC-1 是检测细胞中期凋亡、Tunel 是检测细胞晚期凋亡。
可能是后期洗涤次数过多,建议减少洗涤次数,或者洗涤动作轻柔一些。
可以。
Annexin V 是检测细胞早期凋亡,JC-1 是检测细胞中期凋亡、Tunel 是检测细胞晚期凋亡。
可以,但是需要制备原生质体,因为植物细胞或是细菌(原核生物)含有细胞壁,具体的染液使用剂量只需浸没细胞即可,染色时间对于不同细胞有一定的不同。
需要,因为 TdT 酶需要经过通透的细胞才能进入细胞内,而 Annexin V 和 JC-1 是不能进行染色固定的。
不需要,对于贴壁细胞,要先用PBS 洗 2-3 次,然后直接用多聚甲醛固定细胞, 通透处理,染色观察。
4℃放置25 min左右,选择4%多聚甲醛作固定液,乙醇、甲醇、酸性固定液,会导致标记效率低;固定时间不宜过长,过长导致交联程度过高,进而降低标记效率。