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Q:40704ES需要用 Fluo-4 标记细胞进行钙通量分析,标记后多久可以保留染料?

将染料加入细胞后,细胞内酯酶从染料中除去AM部分。当AM基团被移除时,染料能够结合钙和发出荧光。由于染料不与任何细胞成分共价结合,因此可能会主动从细胞中流出。流出速度取决于细胞的固有特性,培养条件和其他因素。染料保留的时间并不长,建议染色后应立即进行检测,也可以使用丙磺舒限制主动外流造成的荧光损失。

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Q:40705ES JC-10和JC-1比较,升级、改进的点?

JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针,是JC-1的优越替代物。与JC-1相比,具有以下几个重要优势:1)溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低;2)使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化;3)荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比;4)结果更稳定——优化探针…

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Q:40706ES阴性对照中线粒体都是正常的线粒体,为什么也可以观察到绿色的荧光,而且红色的也看不到细胞形态的原因是?

阴性对照可以拍到绿色可能是因为染色的时候加入的染料较多,从而使阴性对照可以排除绿色的荧光,可以适当的降低探针的浓度。绿色可以看到整个形态是因为单体(绿光)是散落在细胞质中的,而聚合体(红色)是结合到线粒体上的,有些细胞中线粒体分布是不均匀的,能否完整的看到细胞的形态是和线粒体的分布也是有一定的原因的…

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Q:40706ES该JC-1是否可用于分离纯化的完整线粒体膜电位的检测?JC-1的建议工作液如何配置?对应的纯化线粒体的量应为多少?加入JC-1后多久可以检测?

可以用于纯化分离得到的完整线粒体的膜电位的检测。JC-1的工作液及线粒体用量的比例为:0.9 mL JC-1染色工作液(1×)中加入0.1 mL总蛋白量为10-100 µg纯化的线粒体。加入JC-1工作液3-5 min后即可进行检测。但需留意对于冷冻的纯化线粒体不可用于进行膜电位的检测,因线粒体膜经…

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Q:40710ES为什么样本使用多聚甲醛,甲醛或者戊二醛固定,则需要进行RNase处理。样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,通常不需要此步操作?

甲醛、多聚甲醛戊二醛固定液固定原理是交联,酶在交联过程中会失活,若要去除RNA需要再加入RNase处理。甲醇醋酸丙酮固定原理是变性,但是对蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解,所以不需要再加入RNase处理。

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