细胞分析FAQ

-20℃避光保存，半年有效。

大致有 3 个原因：1.溶酶体探针浓度过低，建议适当增大浓度；2.染色时间过短，建议延长染色时间；3.染色完之后，放置过长时间才检测信号；建议染色完立刻检测。

大致有 3 个原因：先用多聚甲醛 乙醛等固定细胞，破坏了溶酶体的酸性环境。染色完后，又用多聚甲醛固定细胞，或者透化细胞，破坏了溶酶体的酸性环境；染色前后均不建议固定细胞；染色完到上机检测这一段时间过长，并且没有避光处理。建议避光染色，染色完立即检测荧光信号。

iFluor 系列的 40737、40762、40736 均为粉末，40734 和 40735 均为液体形式提供。对于 300T的含量不是指含有 300ul，具体的 300T 是指能检测 300 次左右。

需做好通透，建议延长透化时间，延长染色时间。

不可以，荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记。可以同于流式检测。

不会影响鬼笔环肽的染色效果。

可以，例如可以与 DAPI 溶液对细胞核进行复染。

可以和抗体共染，可以先染抗体，再做鬼笔环肽的染色。

可以用溶于PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。

不建议这样操作，因为封片后鬼笔环肽的荧光信号会逐渐减弱。建议尽快检测。

不能用于活细胞的染色，其分子量较大，需固定通透后才可进入细胞对骨架染色。

可以先孵育一抗二抗再染色鬼笔环肽。

产品为液体形式提供，浓度是1mg/ml，300T对应的原液是30ul。

1.可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU） 共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。

建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

可以用溶于 PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。

当细胞和组织经由二甲苯或丙酮之类的溶剂处理时（例如组织切片脱石蜡期间），它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片，或者可以使用抗肌动蛋白抗体。对于石蜡切片不适用。

1. 摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。2. 细胞未固定好，建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。3. 细胞未透化彻底，透化时间可相应延长。

这四种探针是对活细胞中的酸性区室进行染色。所以必须要在活细胞状态下染色。