病毒操作时必须应在二级或以上生物安全实验室或生物安全柜中进行,不可使用普通超净工作台操作病毒。
细胞产品技术咨询FAQ
病毒滴度均达到1×106TU/mL及以上,具体病毒滴度请参考具体批次号COA。
SARS-CoV-2受体和药物筛选、中和抗体检测及疫苗效果评价等试验。
这个产品是假病毒表面有Spike蛋白,病毒里面包裹的是GFP和Luciferase基因,感染目的细胞之后可以通过荧光显微镜观察荧光或者通过双荧光素酶实验检测感染效率。假病毒不能通过引物进行测序。
不能反复冻融,每次冻融滴度都会降低10%以上。
可通过观察荧光信号和检测荧光素酶活性评价假病毒感染细胞的活性,该假病毒无自主复制能力。
该病毒是做体外验证实验;未验证过做动物实验;是一次性使用的。
不是的,提供的假病毒是HIV载体。
是largeTantigen,MOI测定后可以直接使用这个病毒感染细胞,puro处理培养即可。
这款假病毒是逆转录病毒载体,用于SARS病毒核酸检测试剂能力验证以及提取试剂盒的性能验证,不带荧光素酶和GFP。
没有灭活过,不推荐用于感染细胞,因为进入细胞后不能组织病毒,不能表达NP蛋白。
可以。
没有灭活过,不推荐用于感染细胞,因为进入细胞后不能组织病毒,不能表达NP蛋白。
投入量依据样本类型而定。细胞上清样本,推荐约 1×10¹¹ 颗粒;样本纯度较高时,1×10¹⁰颗粒也可。血液样本,至少需要 1×10¹¹~1×10¹² 颗粒。
建议保存于 -80℃。提取后的外泌体在 -20℃ 短期(1-3 天)可保持基本性状,但超过一周后粒径分布和数量会明显下降;-80℃ 长期保存可有效维持外泌体完整性。建议分装保存、避免反复冻融。
沉淀法(如 PEG 沉淀、聚合物沉淀)对染色后的外泌体本身无明显影响。操作建议保持 4℃ 低温、离心转速不超过 12,000×g、动作温和,避免剧烈涡旋。如对外泌体完整性要求更高,可改用超滤管法。
主流方法包括:①差速超速离心——金标准,纯度高但设备要求高;②聚合物沉淀法(PEG/共沉淀)——操作简便、适合常规研究;③尺寸排阻色谱(SEC)——保留天然状态好;④超滤/过滤柱——快速去除大颗粒杂质。各方法在得率、纯度与完整性上各有取舍,可据下游实验选择。
提取后的外泌体建议用 PBS 重悬后 -80℃ 分装保存,避免反复冻融(冻融不超过 2 次);短期 4℃ 可暂存。运输采用干冰冷链;到货后立即 -80℃ 冻存。
常规鉴定包括:①粒径与浓度——NTA 或纳米流式;②标志物蛋白——WB 或 ELISA 检测 CD9、CD63、CD81 及阴性标志物(如 Calnexin);③形态——电镜观察杯状/碟状结构。具体方案可结合研究目的设计。
具备纯化富集作用。本款外泌体纯化柱孔径为 220 nm,可截留粒径>220 nm 的大颗粒杂质(细胞碎片、蛋白聚集体等),对 30‑200 nm 范围内的外泌体实现初步纯化与浓缩。纯化柱为一次性耗材,不建议重复使用。