不可以。虽然 EdU 是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click 反应必须在固定和通透的样品上进行。
叠氮化物和炔烃类间 Click 反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA 洗涤的次数。同时, 也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click 反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,还可在无 EdU 体系中进…
请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;为确保 Click 反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化 Click 反应的有效浓度降低。所以在 Click 反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如 EDTA、EGTA…
分装保存在-20 ℃冰箱中,可稳定保存 1 个月。
注射时可将EdU 注射液进一步稀释,可采用 PBS 或生理盐水稀释,不会影响 EdU 的稳定性。
EdU检测原理是将胸腺嘧啶类似物掺入S期新合成的DNA中,因此标记的是正在增殖的细胞。血管内皮细胞在正常静息组织中增殖率很低,所以说血管样本相对不易检测到EdU阳性。但在血管新生时会活跃增殖,此时可以有效检测增殖中的血管内皮细胞。
在DMSO中EDU溶解度为10mg/ml。
暂未在拟南芥、水稻等植物组织样本未验证过,如需检测请参考文献:PMID:30891050和PMID:20181034。
这款试剂盒是检测细胞周期的,细胞周期检测中细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期的分析。而对于凋亡的检测由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染,在流式检…
染色缓冲液可以用PBS或D-PBS代替。
一般是G1期数据都基本没有变化,抑制细胞周期的药物处理就是G2/M期增加,S期减少,通常是看各个时期的比值。
不推荐这样做,如果直接用70-75%的乙醇,会导致固定效果差或者出现细胞固定后无沉淀的现象。建议先用PBS重悬细胞后,再加入无水乙醇稀释到70-75%。
试剂是没有问题的,出现单峰说明试剂是可以和核酸结合的,只出现单峰可能原因有以下几点:1.细胞状态的影响,建议调整细胞状态之后进行实验。2.细胞密度过密,如果细胞接种的时候过密会导致细胞接触抑制。3.原代细胞增殖率低。4.结果分析的原因。
1. 先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入预冷的无水乙醇,终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是:直接加入乙醇会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。乙醇固定之后没有细胞沉淀。2.很可能是洗细胞的过程中丢失了,解决办法有:采用尖底的离心管和水平离心机。离…
RNase A和 PI的浓度都是1mg/ml,Staining Solution成分不公开,可用PBS替代。
当细胞样本发生了凋亡或是细胞损伤占比高,G0/G1+S+G2/M总和会不足100%,凋亡细胞对应的是Sub‑G1。其它可能的原因是细胞黏连形成聚集体以及拟合模型本身的误差。
试剂盒buffer不含ATP。
Annexin V 是检测细胞早期凋亡,JC-1 是检测细胞中期凋亡、Tunel 是检测细胞晚期凋亡。
MTT 配制成溶液后为黄色,需避光保存,长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时, 请勿使用。MTT 溶液在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固,可以 20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
无需过滤。