可以的,既可以定性又可以定量。
标准品为线性化质粒,经限制性内切酶线性化处理后纯化所得,避免了超螺旋质粒在qPCR中因拓扑结构差异引起的定量偏差,确保标准曲线的准确性和线性范围。
不可以,因为这个仪器不具备CY5通道
HIV-1慢病毒空载体上的LTR序列。
本产品是总体积为30ul的储存液,浓度为1mg/ml(约714uM)。
这款产品本身是非无菌的,如用于活细胞的标记及后续共培养需自行进行过滤,推荐使用0.22 μm滤器。
工作液用最好是使用无血清培养基 HBSS 或是 PBS 等缓冲液进行稀释,稀释后的探针工作液即可 直接加入细胞进行检测。
如果是测定胞质内的钙离子建议选择 Fluo-3 4,如果是测定细胞器内较浓钙离子的实验建议采用Rhod-2
为减少各种可能的误差,尽量缩短探针装载后到仪器测定所用的时间(刺激时间除外)。
钙离子探针是要求活细胞检测,因此对于抗体检测应满足活细胞状态以及使用相应的抗体荧光颜 色应与所使用的探针颜色有区分度,不然将难以观察。
当温度在37℃时探针倾向于聚集在胞质,在4℃下更偏向于在线粒体中。推测在37度左右温态环境下,胞浆酯酶会变得活跃从而在Rhod-AM未能达到线粒体之前脱去结构上的AM基团而发出荧光。在冷态环境下,酶活性变缓,探针基团可以先附着于线粒体上而后才水解。
Rhod-2的孵育温度推荐37℃,室温亦可,4℃为非必须温度;时间参考15~60min,预实验可参考30min;对于小鼠原代心肌细胞根据已使用该探针的客户反馈,2.5uM的工作浓度最适,1uM及5uM均可检测到阳性信号,1uM信号较弱,5uM出现有明显的背景。
可以用荧光显微镜,客户的实验目的如果是检测活细胞线粒体超氧化物,就可以用这个的,这个和免疫荧光是没有关系的,免疫荧光是杂抗体的。
这个没有效果图,可降低浓度试一下,这个样本不一样浓度也不一样,需要客户参考一下文献。
建议分先后顺序,先染一个洗完后,再染另一个。
可用PBS 溶解。
可以用于流式检测,推荐使用PE/FL2通道(激发510nm,发射580nm)。如有条件,也可选择396nm激发以获得对超氧化物更特异的信号,减少其他ROS的干扰。工作浓度建议从2-5μM开始摸索,37℃避光孵育10-20 min即可上机,染色后1 h内完成检测以免信号衰减。
缓冲液使用HBSS(含钙镁)培工作液进行染色。
可以的。虽然该产品在510 nm激发时会显示较强荧光信号,但据发现在396 nm超氧化物产物能被选择性激发且由其它非特异性氧化产物造成的干扰最小,所以激发波长选择396nm完全可以,这会使得检测结果更准确。参考文献PMID: 17015830。
对于35mm共聚焦小皿,推荐1-2ml染色液;对于96孔板推荐100ul染色液。推荐37℃孵育10min,但可适当延长孵育时间到10-20min,最长建议不超过30min。