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Q:40776ES rhod-2染线粒体的时候为什么要4℃染色?

当温度在37℃时探针倾向于聚集在胞质,在4℃下更偏向于在线粒体中。推测在37度左右温态环境下,胞浆酯酶会变得活跃从而在Rhod-AM未能达到线粒体之前脱去结构上的AM基团而发出荧光。在冷态环境下,酶活性变缓,探针基团可以先附着于线粒体上而后才水解。

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Q:40776ES Rhod-2探针孵育的温度时间以及对于小鼠原代心肌细胞合适的工作浓度是多少?

Rhod-2的孵育温度推荐37℃,室温亦可,4℃为非必须温度;时间参考15~60min,预实验可参考30min;对于小鼠原代心肌细胞根据已使用该探针的客户反馈,2.5uM的工作浓度最适,1uM及5uM均可检测到阳性信号,1uM信号较弱,5uM出现有明显的背景。

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Q:40778ES50 可以做流式检测吗?

可以用于流式检测,推荐使用PE/FL2通道(激发510nm,发射580nm)。如有条件,也可选择396nm激发以获得对超氧化物更特异的信号,减少其他ROS的干扰。工作浓度建议从2-5μM开始摸索,37℃避光孵育10-20 min即可上机,染色后1 h内完成检测以免信号衰减。

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Q:40778ES MitoSox Red 线粒体超氧化物红色荧光探针激发波长是否可以选择396 nm?

可以的。虽然该产品在510 nm激发时会显示较强荧光信号,但据发现在396 nm超氧化物产物能被选择性激发且由其它非特异性氧化产物造成的干扰最小,所以激发波长选择396nm完全可以,这会使得检测结果更准确。参考文献PMID: 17015830。

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