当细胞和组织经由二甲苯或丙酮之类的溶剂处理时（例如组织切片脱石蜡期间），它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片，或者可以使用抗肌动蛋白抗体。对于石蜡切片不适用。
1. 摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。2. 细胞未固定好，建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。3. 细胞未透化彻底，透化时间可相应延长。
这四种探针是对活细胞中的酸性区室进行染色。所以必须要在活细胞状态下染色。
固定后会破坏溶酶体的酸性环境从而会造成荧光减弱甚至消失的情况，染色前后均不建议固定。
染色时可先弃培养基，直接加入 100ul 染液，并且这产品不推荐染活细胞，那如果是染活细胞，建议用hoechest 染料。
DAPI被认为是一种半渗透性/无渗透性的细胞核染料。对细胞核的染色性能好坏依赖于细胞系类型。某些细胞系可用DAPI染色，某些完全不可以，而某些标记结果不一致。替代的话，建议用Hoechst 33342或Hoechst 33258，具有同DAPI一样的波长和核酸结合模式，但是有非常好的细胞膜渗透性。
建议用 Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核，这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
两者区别不大，但是 Hoechst 33342 对细胞的毒性作用更小一些，因此一般 Hoechsts 33258 用于细胞固定后再染色，而 Hoechst 33342 则可以对活细胞直接进行染色。Q．DAPI和Hoechst染料相当类似，如何二选一？A：DAPI是非常通用的蓝色荧光染料，用于细胞核复…
建议用 Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核，这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
可提高染料的工作浓度来改善染色效果。
这个没有具体参考数据，可进行预实验，在推荐范围内调整。
这个要根据细胞类型，细胞的量和染色效果来判断的。
鬼笔环肽对于活细胞的f-actin标记进行动态观察并不合适，因其分子量较大，需破膜后才能很好的标记，目前暂无合适的产品推荐。
不适用。石蜡切片染色是需要脱蜡。但是脱蜡可能会影响鬼笔环肽结合的方式来影响F- actin，可能检测不到信号，推荐用冰冻切片。
可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU）共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。
石蜡切片不适用，冰冻切片可以尝试，如效果不好，建议使用抗肌动蛋白的抗体。
建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
是荧光基团的不同，激发出的荧光颜色不同，用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色，对于选择需要机器满足激发和发射波长要求。
非必须，建议使用BSA封闭。
对于对固定的细胞染色，不区分种属。