工作液是需要现配现用的,不建议保存。
细胞产品技术咨询FAQ
可以使用荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪以及流式细胞仪,推荐使用共聚焦显微镜。
建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
-20℃避光保存,半年有效。
大致有 3 个原因:1.溶酶体探针浓度过低,建议适当增大浓度;2.染色时间过短,建议延长染色时间;3.染色完之后,放置过长时间才检测信号;建议染色完立刻检测。
大致有 3 个原因:先用多聚甲醛 乙醛等固定细胞,破坏了溶酶体的酸性环境。染色完后,又用多聚甲醛固定细胞,或者透化细胞,破坏了溶酶体的酸性环境;染色前后均不建议固定细胞;染色完到上机检测这一段时间过长,并且没有避光处理。建议避光染色,染色完立即检测荧光信号。
iFluor 系列的 40737、40762、40736 均为粉末,40734 和 40735 均为液体形式提供。对于 300T的含量不是指含有 300ul,具体的 300T 是指能检测 300 次左右。
需做好通透,建议延长透化时间,延长染色时间。
不可以,荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性,因此没有被广泛用于活细胞标记。可以同于流式检测。
不会影响鬼笔环肽的染色效果。
可以,例如可以与 DAPI 溶液对细胞核进行复染。
可以和抗体共染,可以先染抗体,再做鬼笔环肽的染色。
可以用溶于PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定,固定时避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。
不建议这样操作,因为封片后鬼笔环肽的荧光信号会逐渐减弱。建议尽快检测。
不能用于活细胞的染色,其分子量较大,需固定通透后才可进入细胞对骨架染色。
可以先孵育一抗二抗再染色鬼笔环肽。
产品为液体形式提供,浓度是1mg/ml,300T对应的原液是30ul。
1.可能是使用浓度过高造成,可以再适当降低一些试剂浓度;可以在寻找视野时使用低能量的激光,待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应(例:EDU) 共染色,否则鬼笔环肽没荧光信号。
建议添加的量是能够完全浸没细胞即可,不同的细胞染色情况不同,相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
可以用溶于 PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定,固定时避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。