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Q:10623ES是否可以帮忙设计mRNA体外转录DNA模板序列(主要是新冠疫苗应用方向的)?

不提供相关服务。新冠疫苗目前主要可以直接参考的还是外网开源的BioNtech和Moderna的疫苗序列。主要原件序列基本是可靠的,除了polyA尾不全;国内比较早的新冠疫苗,还是基于RBD蛋白序列的比较多。这块我们没有要到具体的序列,基本都是各个研发团队的核心技术了。

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Q:10624ES采用T7聚合酶转录的时候,有没有什么办法,减少polyA尾多转录的问题?

这一情况是T7反应体系的自身特性,无法完全避免。根据相关的文献,控制mRNA自延长的思路主要还是两方面:①对模板3'末端上游序列进行优化;②控制IVT产量,高产量下自我延伸的几率会更高

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Q:10625ES采用T7聚合酶转录的时候,有没有什么办法,减少polyA尾多转录的问题?

这一情况是T7反应体系的自身特性,无法完全避免。根据相关的文献,控制mRNA自延长的思路主要还是两方面:①对模板3'末端上游序列进行优化;②控制IVT产量,高产量下自我延伸的几率会更高

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Q:10650ES UTP的消光系数为10,000 Lmol-1cm-1 at 262 nm,而N1-甲基假UTP的消光系数为8,877 Lmol-1cm-1 at 271 nm,二者差别较大,在用N1-甲基假UTP替代UT…

目前没有了解过是否影响计算,NanoDrop 的检测方法比较粗略,如果想要更精确的检测,可以使用Qubit检测RNA的浓度,这两种方法也是市面上比较常见的两种检测方法。

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Q:10664ES模板线性化的酶切位点大多采用BspQI,bsaI,主要是因为什么原因呢?我看它们都属于IIS型限制性内切酶,这个具体有什么影响吗?

mRNA体外转录模板制备方面,限制性内切酶的选择主要基于以下因素:①切口处应该是5´ 突出末端或者平末端。3´ 突出末端的存在会增加从模板体外转录(IVT)产生的假副产物;②酶切位点识别序列尽可能长;识别序列越长,该序列出现在基因片段中的可能性就越小;③IIS 型内切酶是用于疫苗开发中质粒线性化的首…

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Q:10670ES翌圣的转录buffer,Mg2+浓度达到460mM,比N*、T*和其他国产厂家的都高。有关文献报导Mg2+浓度对转录副产物dsRNA量有着显著影响,有没有相关的研究数据。

我们转录Buffer是10X的浓度,在IVT体系的终浓度是46mM,是会高于一些其他品牌。我们有做过Mg2+单因素研究的一些数据(具体不太方便公开),确定了该使用浓度。我们另外提供不含Mg2+的buffer(10669ES),方便客户自行调配Mg2+在转录体系中的终浓度,从而调节IVT产量和副产物之…

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