体外转录FAQ

单卖，货号是10684ES。

是转染细胞就可表达荧光的，转染浓度没有标准浓度，常规在1-5 μg/mL之间，一般是转染悬浮细胞用量少一些，贴壁细胞多一些，是游离的mRNA,没有包封。

LNP包封好的

不提供相关服务。新冠疫苗目前主要可以直接参考的还是外网开源的BioNtech和Moderna的疫苗序列。主要原件序列基本是可靠的，除了polyA尾不全；国内比较早的新冠疫苗，还是基于RBD蛋白序列的比较多。这块我们没有要到具体的序列，基本都是各个研发团队的核心技术了。

加帽用的是安捷伦系列（6230B TOF），加尾用的Thermo的QE或waters的Rda。

我们这个试剂盒没有加poly A尾的组分，可以在模板制备阶段将A尾构建到质粒上，长度一般在20-200。

建议13000rcf以上均可满足要求。

沉淀是亚精胺，容易析出，属于正常现象，可以手握加速溶解。

我们的T7酶测试了相对保真度，与Thermo的保真度差不多，大概万分之四的突变率。目前野生型的T7保真度都差不多，基本能满足客户的需求。现项目中没有更高保真度T7的开发计划。

是通过LiCl纯化后进行测定的，我们有记录过相关数据A260/280大概比值再在2.0-2.1之间；使用我们的羧基磁珠纯化也基本在这个范围以内。具体数据可以整理之后再分享。

这一情况是T7反应体系的自身特性，无法完全避免。根据相关的文献，控制mRNA自延长的思路主要还是两方面：①对模板3'末端上游序列进行优化；②控制IVT产量，高产量下自我延伸的几率会更高

我们的T7酶测试了相对保真度，与Thermo的保真度差不多，大概万分之四的突变率。目前野生型的T7保真度都差不多，基本能满足客户的需求。现项目中没有更高保真度T7的开发计划。

是通过LiCl纯化后进行测定的，我们有记录过相关数据A260/280大概比值再在2.0-2.1之间；使用我们的羧基磁珠纯化也基本在这个范围以内。具体数据可以整理之后再分享。

这一情况是T7反应体系的自身特性，无法完全避免。根据相关的文献，控制mRNA自延长的思路主要还是两方面：①对模板3'末端上游序列进行优化；②控制IVT产量，高产量下自我延伸的几率会更高

目前没有了解过是否影响计算，NanoDrop 的检测方法比较粗略，如果想要更精确的检测，可以使用Qubit检测RNA的浓度，这两种方法也是市面上比较常见的两种检测方法。

一般采用完全替代的方式，假尿苷或者 N1-甲基假尿苷的使用量与原体系尿苷的使用量一致。

mRNA体外转录模板制备方面，限制性内切酶的选择主要基于以下因素：①切口处应该是5´ 突出末端或者平末端。3´ 突出末端的存在会增加从模板体外转录（IVT）产生的假副产物；②酶切位点识别序列尽可能长；识别序列越长，该序列出现在基因片段中的可能性就越小；③IIS 型内切酶是用于疫苗开发中质粒线性化的首…

我们转录Buffer是10X的浓度，在IVT体系的终浓度是46mM，是会高于一些其他品牌。我们有做过Mg2+单因素研究的一些数据（具体不太方便公开），确定了该使用浓度。我们另外提供不含Mg2+的buffer（10669ES），方便客户自行调配Mg2+在转录体系中的终浓度，从而调节IVT产量和副产物之…

配方不同，10670ES是升级版本，我们优先推荐使用10670ES,应用场景更广，性能更好一些。

共转录要求对于模板的起始位点要求必须是 AGG* 开头两步法对于位点无要求，但我司目前产品对于AGGG起始位点的产量最高，主要是T7酶的偏好性导致。