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Q:19036ES提取的产量低?

可能原因如下:中低拷贝质粒:长片段、表达型载体常以低拷贝为主,建议加大菌体使用量,菌液过夜培养菌种问题:菌种保存中质粒丢失,养菌前先划线活化,稳定产量菌体未充分裂解:在buffer种充分重悬,避免成团试剂准备有误:有沉淀析出的溶液需要加热;加入的乙醇体积不准洗脱不充分:洗脱液预热,二次洗脱

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Q:19101ES胶回收可以直接回收 PCR 原液吗?

可以。溶液还是加溶胶液,只是不用置于 50-60℃温浴了,其他步骤不变。 比例为 PCR 原液 50 uL体系,加 200 uL 溶胶液。片段小的话,也按照说明书的方式加入异丙醇。但更推荐专门的PCR产物纯化试剂盒(货号:19106ES)。

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Q:19101ES回收率低,有什么建议吗?

1)电泳的时候,用新鲜的电泳液,不新鲜的会导致PH值升高,降低DNA和膜的吸附力;2)切胶的时候在保证目的片段的情况下,尽可能的减少胶体积,并且减少紫外灯下的暴露时间;3)观察加了溶胶液后混合物的颜色,如果是如溶液颜色为橙色或紫色,需要加入10μL3M醋酸钠(pH值5.2)溶液混合。混合物的颜色变成…

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Q:19201ES 提取RNA 降解?

可能原因如下:(1) 组织样本保存不当。RNA 提取时要选新鲜组织或细胞样本,若为冻存样本,尽量避免反复冻融。样品离开活体或原来的生长环境后,样品中的内源RNase 开始降解 RNA,降解速度与内源 RNase 的含量及温度有关;(2) 投入样本较多,导致裂解不充分。试剂不能有效抑制样品中所有的 R…

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Q:19201ES提取的 RNA 有基因组 DNA 污染?

(1) 向裂解液中加入氯仿后,需要在低温下(2-8℃)高速离心。离心后,RNA 被抽提到上层的水相中,中、下层是有机相,含有氯仿,DNA 即存在于中层。氯仿在常温下会与水以一定比例互溶,因此,常温离心会导致上层水相中也有少量基因组DNA 的污染。吸取上层液体时, 应非常小心,避免吸到中间层和下层;(…

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Q:19211ES细胞数要求 5×10^6,细胞数量可否高于或低于该数值?

细胞数量控制在10^6~10^7范围内均可。若细胞数量低于5×10^6,起始细胞量不足,会降低核酸提取效率;若细胞数量偏高,则需相应增加裂解液用量。裂解液不足会造成内源 RNA 酶裂解不充分、抑制效果不佳,进而引发 RNA 降解。同时受吸附柱负载上限限制,不可过度增加样本投入量,否则易造成杂质去除不…

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