有末端转移酶活性。
逆转录系列FAQ
可以使用Cat#15663ES,配方不完全一样,但可以替换。
一是该产品增强了与模板的亲和力,二是由于组分的设置,使得 RNA 最大投入量可以达到 12μL,对于低浓度模板可通过增大投入体积来增大模板投入量。
反转录后的产物是RNA和cDNA的杂交链,并不是DNA双链,其稳定性相较于后者来说要低一些。
下游通用引物是保密的。当前市面上常见到的加A法反转录试剂中,加上的带A序列是不一样的,均是根据自己的加尾酶设计并完善的,出于专利保护所以不做公开。
11149ES带有蓝色示踪剂,可提示加样进度。11150ES不带有示踪剂。经测试,添加一定量的示踪剂不影响反转录效率,后续qPCR的Ct值、熔解曲线峰值和TM值未受到负面影响。其它应用场景,如担示踪剂影响,可选11150ES。
其中的逆转录酶是通过改造后的,不具备Rnase H活性。
组分A为蓝色,具有加样示踪的作用,不建议用于下游LAMP等检测反应,可能会影响显色。
可以,如果RNA提取时候已经处理过gDNA, 可以不加gDNA Remover Mix(组分B),反应体系用RNase-free Water补齐。可以,参考说明书等比例扩大反应体系,注意在使用PCR仪时修改程序上的反应体积。
有 A 尾的 lncRNA 用预混液和 KIT ( 11123/11141/11121/11139) 都可以, circRNA、miRNA 和无 A 尾的 lncRNA 用 KIT(11121/11139)。microRNA 需要特殊的茎环引物,需特别针对的逆转录试剂盒。
a)目的不同:克隆逆转后的 cDNA 后续用于基因克隆,后续实验以普通 PCR 为主; 定量逆转后的 cDNA 后续用于基因定量,后续实验以qPCR 为主。逆转录过程不同:克隆逆转使用 Oligo dT,保证合成的长度。随机引物使用较少; 定量逆转使用 Oligo dT 或随机引物,或两者混合使用。…
他物种)的RNA 逆转录的试剂盒呢?RNA 的物种与逆转录没有很大关系,RNA 质量与逆转录有关。所以,得到 RNA 后, 逆转录试剂盒都可以用,没有特别针对的。
是的,有的 lncRNA 含有A 尾,有的不含,所以这两种引物都要加。
不同 miRNA 表达丰度不同,建议尽量投入 0.5-1 μg miRNA。
可以做 circRNA 和无尾的lncRNA。
mix 和 kit 逆转录长度不同的,这个推荐用 11121 和 11139。
是随机引物和oligo dT的混合物。
有A 尾的 lncRNA 可以逆转录, circRNA miRNA 和无 A 尾的 lncRNA 用 不能进行逆转录。microRNA 需要特殊的茎环引物, 需特别针对的逆转录试剂盒。
RNA 的物种与逆转录没有很大关系,RNA 质量与逆转录有关。所以,得到 RNA 后,逆转录试剂盒都可以用,没有特别针对的。
根据实验目的不同,可按下列建议选择(选择指南可见下表):a)对于全长第一链 cDNA 合成,且模板为真核生物来源,推荐选择Oligo (dT)引物。b)当目标区域具有复杂二级结构或模板为原核生物来源,推荐选择 Random Primers 引物。c)基因特异性引物(GSP)是与模板序列互补的引物,适…