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适用于各种亲和层析介质的装填。可直接连接 Akata 等蛋白纯化仪使用，也可通过鲁尔接头搭配注射器进行手动纯化或搭配蠕动泵使用。

本品为中低压层析空柱，规格为 1 mL。

先跑胶确定蛋白是未结合还是未洗脱，通过对比纯化样品、流穿液、洗脱液的目的蛋白条带确定。如果是未结合：1、可能是样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂；建议样品透析或用结合buffer 稀释。2、可能是标签聚集，可以加入1mM的DTT改善此情况。

1、可以先尝试下在洗杂步骤提高盐浓度或者洗杂buffer中加入终浓度0.1%非离子型去污剂。2、可能是目的蛋白降解；可以WB验证，建议加一些蛋白酶抑制剂，如 PMSF等。

不能剧烈摇晃，会破坏高度交联的 6%琼脂糖微球；使用前可轻轻充分颠倒若干次， 使琼脂糖珠混合均匀。

具体使用次数与样品有关，可以耐受0.1 M氢氧化钠清洗5次后载量仍有80%以上。

1）根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm 离心 1 min，吸弃上清;2)向离心管中加入5 倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm 离心1 min，吸弃上清，重复两次以上。3)加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育 2-4 h 或者37度孵育30 min-2h。4)孵育结束后…

洗脱结束后可以用较高浓度（20-50mM）的麦芽糖进行一次较为彻底的洗脱，然后用中性缓冲液冲洗，清洗后保存在20%乙醇 1XPBS中，保存温度2-8℃。如果使用氢氧化钠清洗的话，后续是需要用中性缓冲液例如PBS冲洗至ph中性，只使用纯水冲洗的话无法达到中和ph的效果，可能会有微量氢氧化钠残留在填料上…

可以尝试降低上样流速，延长结合时间来提高目的蛋白和填料的结合效果。

EDTA的作用是保护MBP标签蛋白免受蛋白酶降解，减少核酸污染带来的问题。如果没这些问题，可以不加。

平衡中NaCl是为了抑制非特异性吸附。

洗脱液中的麦芽糖cas号是6363-53-7，推荐货号719576。

可能是平衡/洗杂不充分；建议增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。

可能是目的蛋白未表达；建议优化实验方案，确保目的蛋白表达。

由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。

由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。

可能是融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力；建议更换载体。

可能是平衡/洗杂不充分；建议加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA 等。

可能是样品pH 值不在内毒素结合范围内；建议用 0.1MNaOH 或 0.1M HCl 调节至 pH7-8。

树脂纯化过其他样品；不用使用过的树脂去除不同样品内毒素。