细胞融合度达到 60%-70%时,换成新鲜的无外泌体血清培养基(或者无血清培养基),待细胞融合度达到 80%-95%左右时收取上清即可。
常使用透射电镜检测(形态)、粒径检测(大小)、Western blot 检测等方法鉴定提取的外泌体。在进行 Western blot 检测时,通常检测外泌体标志蛋白(CD63、CD9、CD81、TSG101 等,优先推荐 CD63 和 TSG101)。
需要,一般按照 1:1 的比例加入 RIPA 试剂,放置在冰上裂解 10-15min,在做 western blot 之前务必做 BCA 蛋白定量。
无,该检测属于定性检测。
该步骤主要用于去除样本或试剂中产生的不溶性杂质沉淀。外泌体实际存在于上清液中,离心产生的沉淀多为蛋白聚集体、脂质团块等不溶性杂质;洗涤后弃除沉淀,保留上清,即可得到纯度更高的外泌体样本。
我们的试剂盒不需要添加1%BSA,是否含1%BSA差距不大。
非无菌。如需无菌,可进行过滤除菌。
可以用于细胞分选,能放流式管并且磁力在7500高斯以上就可以。
得率为80%左右。
可以用于细胞分选,能放流式管并且磁力在7500高斯以上就可以。
看初始细胞的量,回收率大概为70-80%,计算公式=10^7个细胞*15%(初始CD8细胞含量)*70%(回收率)。
肿瘤小鼠经过特殊处理后,脾脏细胞种类有变化,导致阴选试剂盒中抗体Cocktail不合适,对于这种特殊样本,推荐用阳选磁珠。
不包含。我们的磁珠可搭配美天旎的分选柱使用。
由于稀释的工作液极不稳定,建议即用即配。
可能是未静置。灌胶前,务必将凝胶溶液平衡到室温(如放置几分钟),可有效避免凝胶中气泡的形成。
本试剂盒所配制凝胶可用于变性PAGE 凝胶电泳,也可用于非变性PAGE凝胶电泳。
IgG 可能使用过多,建议减少其用量。
该产品可以与 PEG 在免疫沉淀中作为共沉淀试剂使用。
经 SDS-PAGE 分析该IgG 的纯度≥97%。
不建议,推荐使用 PBS。