染色时可先弃培养基,直接加入 100ul 染液,并且这产品不推荐染活细胞,那如果是染活细胞,建议用hoechest 染料。
DAPI被认为是一种半渗透性/无渗透性的细胞核染料。对细胞核的染色性能好坏依赖于细胞系类型。某些细胞系可用DAPI染色,某些完全不可以,而某些标记结果不一致。替代的话,建议用Hoechst 33342或Hoechst 33258,具有同DAPI一样的波长和核酸结合模式,但是有非常好的细胞膜渗透性。
建议用 Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
两者区别不大,但是 Hoechst 33342 对细胞的毒性作用更小一些,因此一般 Hoechsts 33258 用于细胞固定后再染色,而 Hoechst 33342 则可以对活细胞直接进行染色。Q.DAPI和Hoechst染料相当类似,如何二选一?A:DAPI是非常通用的蓝色荧光染料,用于细胞核复…
建议用 Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
可提高染料的工作浓度来改善染色效果。
这个没有具体参考数据,可进行预实验,在推荐范围内调整。
这个要根据细胞类型,细胞的量和染色效果来判断的。
鬼笔环肽对于活细胞的f-actin标记进行动态观察并不合适,因其分子量较大,需破膜后才能很好的标记,目前暂无合适的产品推荐。
不适用。石蜡切片染色是需要脱蜡。但是脱蜡可能会影响鬼笔环肽结合的方式来影响F- actin,可能检测不到信号,推荐用冰冻切片。
可能是使用浓度过高造成,可以再适当降低一些试剂浓度;可以在寻找视野时使用低能量的激光,待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。鬼笔环肽不能和点击反应(例:EDU)共染色,否则鬼笔环肽没荧光信号。
石蜡切片不适用,冰冻切片可以尝试,如效果不好,建议使用抗肌动蛋白的抗体。
建议添加的量是能够完全浸没细胞即可,不同的细胞染色情况不同,相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
是荧光基团的不同,激发出的荧光颜色不同,用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色,对于选择需要机器满足激发和发射波长要求。
非必须,建议使用BSA封闭。
对于对固定的细胞染色,不区分种属。
由于植物含细胞壁,因此在未破坏细胞壁时染色进入细胞内较为困难,因此对于含细胞壁细胞染色可以去除细胞壁制备原生质体进行染色。
染色后应尽快检测。
外泌体拥有膜结构,理论上可被 Dil 探针染色。但本品未开展外泌体染色相关验证实验,暂无配套数据。如需要用于外泌体标记,建议查阅相关文献,并自行开展预实验验证染色效果。
PBS中检测到荧光是正常的,因为该产品本身具有荧光。在穿透活细胞膜进入细胞内后转变成不具细胞渗透性的反应产物,该产物能够发出强且明亮的红色荧光。