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链霉亲和素。

根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。

不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。

若蛋白发生聚集，建议在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如 0.1%Triton X-100 或 Tween-20。

具体上样量要参考填料的载量， 该产品的载量为＞ 40 mg 6 × His-tagged protein/mL 基质。

所用水和 Buffer 在使用前最好用 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤除菌。

可以重复使用。重复使用次数和样品和使用情况有关，一般可重复10 次左右。

>20 mg GST protein/mL 基质（40 kDa）。

可以调整下洗杂的缓冲液，1.补加氯化钠浓度至0.5M左右，PBS溶液中氯化钠含量约0.15M，可以再补加0.35M左右。 2. PBS中添加终浓度0.1-0.2%Tween-20，通过去污剂作用减少蛋白非特异性吸附。 3. 洗杂步骤可以在清洗2-3次后将填料转移至新的EP管中继续清洗。

本品谷胱甘肽纯化树脂由琼脂糖微球构成，若干次颠倒可使琼脂糖珠混合均匀。

尽量避免，最好在 4℃或者冰上操作。

可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；先判断是样品中本身表达量低，还是未结合填料或者是未被洗脱下来。

可能是细胞破碎过度，建议减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1 倍 10 mg/mL 溶菌酶，25 mM Tris-HCl，pH 8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与 GST 融合目的蛋白的共纯化。

过度的裂解使目的蛋白变性，建议使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。

可能是洗脱液中谷胱甘肽浓度太低，建议增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50 mM Tris-HCl，20-40 mM 还原型谷胱甘肽pH 8.0 洗脱。

可能是抗体与E. coli 的各种反应，建议抗体吸附E. coli 蛋白：GST-抗体；超声处理去除 GST 抗体，可以用 Western Blot 检测。

可能是目的蛋白聚集产生沉淀，建议在细胞裂解前溶液中加入 DTT，终浓度为 1-10 mM。

可能是Mr 70000 蛋白与目的蛋白一起纯化下来。Mr 70000 蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK 的产物，建议可以在目的蛋白中加入 50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4 在 37℃加热 10min 去除。

可能是非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱，建议在洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如 0.1%的 Triton X-100 或者 2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷 Tween-20。