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可能是样品非特异性吸附在树脂上；建议增加样品和平衡液的NaCl 浓度。

20%DMSO，20%乙醇，20%甘油；1M 尿素，300mM 咪唑；0.05% Tween 20， 10mM DTT 等

可根据填料的内毒素载量，可检测自己样品中的内毒素含量确定；如果实在无条件检测自己样品中的内毒素的含量，初次实验可按照填料：样品体积比=1：1或1：2上样

酸碱交替清洗去除偶联不牢的组分以减少后续纯化时配体脱落。

看您的抗原稳定性吧，您抗原是蛋白还是多肽,一般可以用接近10次左右。用几次之后不结合抗体了说明不能用了。

2）抗原上的巯基位点有没有数量限制？1）TCEP这个测试过已经是完全过量可以还原蛋白。如需调整TECP用量可以做几个浓度梯度对比还原后巯基的数量。2）没有限制。

1.5mg左右

结合生物素化BSA载量约4mg/ml介质。

减少杂质以防阻塞柱子。

最好不要，可轻轻搅拌填料或者敲打层析柱以排除气泡。

由于盐酸胍的带电性强，会中和 SDS 的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS 作为透析液，透析两次，每次 1 小时，透析液的体积可控制在样本的 100 倍）。

一般用 2 倍柱体积的 0.1 M NaOH 或 6 M 盐酸胍或 8 M 尿素溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS，pH 7.4 清洗，来去除一些沉淀或变形物质；用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS…

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来。纯化亚氨基生物素标签蛋白可以在非变性的条件下洗脱。

1)根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm离心1min，吸弃上清；向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm离心1min，吸弃上清; 重复两次以上。加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育2-4 h或者37℃孵育30 min-2 h。孵育结束后，1000 rpm离心1…

推荐流速 1 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。

链霉亲和素。

根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。

不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。

推荐流速 1 -5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率， 收集流出液，待检测。