可以使用非变性洗脱方式。
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介质的载量本身就不高,洗脱浓度有可能较低,有可能因浓度较低而看不到明显条带。建议下一步增加洗脱强度。
通常结合抗体纯化柱使用,或者前期已将带有 HA 标签的抗体纯化出来,反应条件如下:加入 150ug/ml,洗脱HA 融合蛋白,4℃缓慢孵育 30min,500rpm 离心 30S, 收集上清.
加入 5 倍柱体积的酸性洗脱液,收集管中预先加好中和液 50 µl 中和液/ml 洗脱液,分管收集。 注意:酸性洗脱后填料要立即用平衡液平衡,Anti-HA Affinity gel 在洗脱液中不要超过 20 分钟。酸性洗脱液:0.1M glycine HCl,pH2.0-2.8,中和液: 1M T…
可以。该产品可用于Myc标签蛋白免疫沉淀(IP)。
可以。该产品适用于V5标签蛋白免疫沉淀(IP)。
禁止在不含甘油的溶液中冻存。
建议在 4°离心,因为蛋白在室温下容易降解。
可以。该产品可用于his标签蛋白免疫沉淀(IP)。
禁止在不含甘油的溶液中冻存。
脱盐和置换缓冲液。
脱盐对柱效的要求不是很高。对柱高没要求。
G25如果用于脱盐目的蛋白要大于5KD。
不能这样操作的,DNA,RNA会有干扰。一般我们只用于纯品的偶联;如果是在NHS磁珠上先固定这蛋白对应的抗体,然后通过抗体结合蛋白, 可以去除多余的核酸。
不可以,这个是模拟纯化条件的平衡和洗脱
稀盐酸是清洗去除磁珠保护液。PEG和氯化钠理论不影响NHS偶联。
是配0.1M的乙酸钠和0.5M的氯化钠,再用乙酸调PH定容。
保存液中不能有tris体系,高浓度甘油,叠氮化钠等组分。
~0.11-0.16mmol Cl-/ml 基质。
(1)样品的PH和盐浓度(与结合溶液一致),盐的含量一定要降低到电导5ms/cm以下(约为50 mM NaCl);(2)PH选择的是否合适;(3)如果使用弱的离子交换,要充分平衡,一般要达到10CV以。