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成功需满足：①目的组织或细胞表达荧光素酶基因；②荧光素底物注射成功；③依赖发光部位的组织厚度。若不成功，可从荧光素酶是否表达、底物是否正确注射、发光部位是否过深等方面排查。

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物：在 ATP 和荧光素酶作用下被氧化发光，荧光素过量时发光强度与荧光素酶浓度呈正相关。天然腔肠素（Coelenterazine）则是海肾荧光素酶（Rluc）、Gaussia 荧光素酶（Gluc）等的作用底物。

推荐：①具备生物化学发光检测模块的仪器，如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统、Bruker In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪；②多功能酶标仪需确认具备生物化学发光检测模块（注：不能用荧光显微镜）。

主要在三方面：①溶解性——盐形式易溶于水（钾盐 60 mg/mL、钠盐 100 mg/mL），自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠弱碱调节，甲醇中 10 mg/mL、DMSO 中 50 mg/mL；②毒性——盐形式尤体内成像更方便、毒性更小；③使用效果——无明显差异，体内研究钾盐使用率较高。

有影响。 D-荧光素的纯度直接影响活体成像的信号强度，建议检测选用纯度 ≥99% 的产品。

荧光素钠盐可用于细胞通透性检测，通过检测荧光值（490/514nm)测定物质通透性；D-荧光素钠盐用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不需要激发。萤火虫荧光素酶只识别 D 型，可以产生生物发光，是活体成像、报告基因实验的标准底物。做萤火虫荧光素酶 / 活体成像：必须选 D‑荧光素钠盐（或…

除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用，如体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等。

腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶(Rluc)，Gaussia 分泌型荧光素酶 (Gluc)，以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白 (Photoproteins)。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生…

水或PBS，注意需要不含钙镁离子。Mg2+是催化荧光素底物氧化的重要因素，而 Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子。

可以作为Gaussia荧光素酶(Gluc)的底物，目前只有这一款腔肠素可以作为Gluc的检测底物。

该产品体外成像，所需的ATP和镁离子，1.需要通过细胞培养基来实现。所以需要添加了ATP和镁离子的细胞培养基来稀释探针；2.细胞内本身也含有一定量的ATP和镁,可以促进反应。大部分情况下，细胞含有的ATP和镁是足够进行D-荧光素盐的反应的，但细胞种类不同，含量也不一样。可以先尝试培养基不加额外的AT…

无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2 -thiazoline-4-carboxylic acid。

除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等

过表达稳转细胞一般通过慢病毒转染建立：将目的质粒与慢病毒包装体系共转染包装细胞，收集病毒后感染靶细胞，再以抗性（如 Puromycin/G418）或荧光进行稳转筛选与分选。具体 protocol 可由数据/技术支持提供。

工具病毒（如慢病毒、腺相关病毒等）多用于过表达、干扰或报告基因研究。使用时注意：①生物安全——按相应安全等级（多为 BSL-2）操作；②滴度验证——使用前建议测定实际滴度；③储存与递送——按说明书低温保存、避免反复冻融，感染时优化 MOI 与接种条件。

可以。

病毒操作时必须应在二级或以上生物安全实验室或生物安全柜中进行，不可使用普通超净工作台操作病毒。

病毒滴度均达到1×106TU/mL及以上，具体病毒滴度请参考具体批次号COA。

SARS-CoV-2受体和药物筛选、中和抗体检测及疫苗效果评价等试验。

这个产品是假病毒表面有Spike蛋白，病毒里面包裹的是GFP和Luciferase基因，感染目的细胞之后可以通过荧光显微镜观察荧光或者通过双荧光素酶实验检测感染效率。假病毒不能通过引物进行测序。