将染料加入细胞后，细胞内酯酶从染料中除去AM部分。当AM基团被移除时，染料能够结合钙和发出荧光。由于染料不与任何细胞成分共价结合，因此可能会主动从细胞中流出。流出速度取决于细胞的固有特性，培养条件和其他因素。染料保留的时间并不长，建议染色后应立即进行检测，也可以使用丙磺舒限制主动外流造成的荧光损失。
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不能。因为 Fluo-4 不与任何细胞成分共价结合并且固定会损害膜，染料将不会被细胞保留。
参考文献PMID:27473374，可使用0.5uM Fluo-4，AM于37℃孵育15min。
不能用于组织切片染色。建议把活体组织消化成单个细胞，保证细胞的活性，再进行染色。
不可以，JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位的。固定会破坏电势，导致探针无法聚集在线粒体上，而失去特异性。
JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针，是JC-1的优越替代物。与JC-1相比，具有以下几个重要优势:1)溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低；2)使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化；3)荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比；4）结果更稳定——优化探针…
可以用13000 g 离心JC-1工作液约1-2分钟 。
前者只是一个探针的粉末；后者是液体，又多了缓冲液，阳性对照和超纯水，两个都可以使用。
先消化下来制成细胞悬液再染色。
阴性对照可以拍到绿色可能是因为染色的时候加入的染料较多，从而使阴性对照可以排除绿色的荧光，可以适当的降低探针的浓度。绿色可以看到整个形态是因为单体（绿光）是散落在细胞质中的，而聚合体（红色）是结合到线粒体上的，有些细胞中线粒体分布是不均匀的，能否完整的看到细胞的形态是和线粒体的分布也是有一定的原因的…
不可以，JC-1实验的样本必须是活细胞。
不可以，JC-1用于活细胞样本的检测，固定后细胞死亡；此外，染色后放置过久会导致荧光淬灭，建议染色30 min内完成检测。
无法直接检测组织，可先将组织制备成单细胞悬液，再按照悬浮细胞的操作步骤来检测，需对制备方案进行摸索。
取适量JC-1（200×），按照每50μL JC-1（200×）加入8 mL 超纯水的比例稀释JC-1，剧烈震荡充分溶解并混匀JC-1，然后再加入2 mL JC-1 染色缓冲液（5×），如溶液后存在红色不溶沉淀可加入千分之一的Tween 20。
可以用于纯化分离得到的完整线粒体的膜电位的检测。JC-1的工作液及线粒体用量的比例为：0.9 mL JC-1染色工作液（1×）中加入0.1 mL总蛋白量为10-100 µg纯化的线粒体。加入JC-1工作液3-5 min后即可进行检测。但需留意对于冷冻的纯化线粒体不可用于进行膜电位的检测，因线粒体膜经…
40710 PI染液或者 40745 7-AAD染液都可以。
甲醛、多聚甲醛戊二醛固定液固定原理是交联，酶在交联过程中会失活，若要去除RNA需要再加入RNase处理。甲醇醋酸丙酮固定原理是变性，但是对蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解，所以不需要再加入RNase处理。
固体含量是1.4mg/管，溶解到B中浓度是2.8mg/mL。
可以直接染色活的细胞或组织，对于固定的细胞或组织通常用 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高，或者染色效果差。
理论上可以。