Q:
10623ES控制体外转录阶段产物中dsRNA含量是否有可行的方案?
关于优化IVT体系与反应条件抑制dsRNA的建议主要还是以下几点:
①降低镁离子浓度;但降低镁离子浓度也会导致RNA合成产量的降低,需要去一个平衡点;
②提高IVT反应温度,50-56℃的反应温度能有效降低产物中dsRNA的含量;但是高温反应对工艺放大设备的要求会不一样,也可能提高成本;
③IVT反应体系中添加某些离散剂,如尿素、甲酰胺等;这个路线我们的工艺研发团队也做了一些摸索,是可以起到抑制dsRNA的效果的,但是否适合工艺放大还有待进一步研究