应用案例柱式法 | 动物组织DNA提取

实验所用试剂设备清单

实验前准备

1.需要自备乙醇，异丙醇，1× PBS，RNaseA。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到70°C备用。

3. 第一次使用前请先在去蛋白液PL中加入指定量无水乙醇；漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入。

操作步骤

1. 将新鲜组织用解剖刀切成小碎块或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180 μL组织裂解液LB的1.5mL离心管中，用大口径枪头吹打混匀。

2. 加入20 μL蛋白酶K溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。

3. 将裂解物放置在55°C水浴30min直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。可选做步骤：如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤3后加5 μL100mg/mLRNaseA(10406ES)溶液， 振荡混匀，室温放置5-10min。

4. 加入200 μL 结合液BD，立刻涡旋振荡充分混匀，70°C放置10min。

5. 冷却后加100 μL 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

6. 将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，13,000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液。

7. 加入500 μL去蛋白液PL（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。

8. 加入600 μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。

9. 重复步骤8一遍。

10. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm 离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇 抑制下游反应。

11. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100 μL洗脱缓冲液EB， 室温放置3-5min，13,000rpm 离心1min。

12. DNA可以存放在-20°C，如果要长时间存放，可以放置在-70°C。

质检结果—DNA浓度和纯度

质检结果—DNA完整度分析

数据来源：山东大学

实验结论

采用翌圣生物离心柱法组织细胞DNA提取试剂盒（18701ES ）提取8个动物组织样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的DNA浓度满足预期要求、纯度较好、完整度好，无明显降解和拖带，满足后续实验需求。