应用方向DNase I——单细胞前处理隐藏但必用的实用酶
背景介绍单细胞实验上机前,需要对样本进行前处理。单细胞悬液制备结果好,那整个单细胞实验也算是成功一大半了。在细胞解离过程中,细胞结团的问题时常发生。细胞结团时,若团块较大,会影响单细胞捕获率或者双胞率。这些细胞团块的产生是因为样本制备过程中产生的环境压力加速了样本内细胞的死亡,从而导致一些凋亡细胞释放出了DNA将周围细胞粘合在一起。这些释放出来的DNA分子需
背景介绍单细胞实验上机前,需要对样本进行前处理。单细胞悬液制备结果好,那整个单细胞实验也算是成功一大半了。在细胞解离过程中,细胞结团的问题时常发生。细胞结团时,若团块较大,会影响单细胞捕获率或者双胞率。这些细胞团块的产生是因为样本制备过程中产生的环境压力加速了样本内细胞的死亡,从而导致一些凋亡细胞释放出了DNA将周围细胞粘合在一起。这些释放出来的DNA分子需
01什么是造血干细胞造血干细胞(Hematopoietic Stem Cells,HSCs)是能自我更新、并分化成红细胞、白细胞等所有类型血细胞的“种子细胞”,主要存在于骨髓、外周血和脐带血中。它既能维持自身数量稳定,又能持续生成各类血细胞满足身体需求,是人体血液系统的核心源头细胞。02造血干细胞的来源造血干细胞是存在于造血组织中的一群原始造血细胞,它不是组
当做完质粒酶切处理后,需要进行电泳割胶回收,片段大小分别1500bp和5500 bp,以下DNA Marker,选用哪一个是最合适的呢?01DNA Marker的片段范围是否合适?选择的Marker其对应的片段范围需要包含对应的目的DNA片段,且尽量处于中间,而不是在两端。在这个情况下,A和B就排除了,其最大条带都已小于5500bp。02目标片段大小附近条带
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)是Piepenburg等人在2006年利用重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶等开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。该技术能够在10~30 min内进行恒温(37~42℃)下的单分子核酸检测,有望成为聚合酶链式反应 (PCR) 替代方案。下面,小翌就带
什么是造血干细胞造血干细胞是维持人体终身造血的核心成体干细胞,作为存在于骨髓、外周血、脐带血中的原始造血细胞,它是所有血液细胞的“祖先”,具有自我更新、多向分化和归巢(移植后自动迁移至骨髓微环境定居并恢复造血功能)的关键特性,临床主要用于治疗白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等血液系统疾病,也可应用于部分遗传性疾病的治疗。图1. Hematopoiesis[1]
01什么是神经干细胞?神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)是一类存在于神经系统中,具有自我更新能力和分化为神经细胞(神经元)、神经胶质细胞(如星形胶质细胞、少突胶质细胞)潜能的干细胞,主要负责神经系统的发育、修复和功能维持。02神经干细胞的来源神经干细胞来源广泛,可根据获取场景(胚胎期/成年期)、组织部位及技术手段分为内源性天然来源和外
01Th细胞简介Th细胞(辅助性T细胞)是由初始CD4⁺ T细胞活化后分化形成的功能性免疫细胞,表面表达CD4分子,需通过T细胞受体识别抗原呈递细胞呈递的MHC-Ⅱ类抗原肽复合物启动活化,是免疫系统的“指挥中枢”。它能分化为Th1、Th2、Th17等多个功能亚群通过分泌特异性细胞因子、直接接触等方式,辅助B细胞产生抗体、增强细胞毒性T细胞的杀伤能力、激活巨噬
细胞因子按照生物学功能可以分为六类:白细胞介素,干扰素,肿瘤坏死因子,集落刺激因子,趋化因子和生长因子。骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins,BMPs)属于转化生长因子(TGF-β)超家族成员,贯穿低等无脊椎动物至高等哺乳动物的生命活动,调控胚胎发育(如骨骼形成)、成体组织修复(如骨折愈合),并与骨质疏松、肿瘤等疾病相关。0
01干扰素概述干扰素是一类由免疫细胞和体细胞在应对病毒入侵、细菌成分等刺激时产生的信号蛋白(细胞因子)。它们是天然免疫的关键组成部分,也是连接天然免疫与适应性免疫的桥梁。干扰素主要根据其受体特异性、氨基酸序列同源性以及生物学功能,分为I型、II型和III型。I型干扰素-抗病毒“快速反应部队”这是种类最多、最重要的一类,是机体对抗病毒的第一道特异性防御线。主要
病毒载体包装的实验流程主要包括质粒制备、细胞培养、质粒转染、病毒收获与纯化四个核心阶段。其中,质粒转染环节是消耗大量质粒的关键步骤,其用量与包装规模直接相关。第一环节质粒制备质粒准备阶段(需中/大量质粒)1.1质粒类型包含:转移质粒:携带目的基因(如CAR基因、sgRNA文库)包装质粒:提供Gag、Pol、Rev等结构蛋白(如psPAX2)包膜质粒:提供VS
01重组蛋白定义利用重组DNA或RNA获得目的蛋自的技术,其原理是将外源基因与载体连接成重组载体,然后转入到宿主菌从而表达目的蛋白。03蛋白表达核心流程概览基因克隆 → 载体构建 → 转化/转染 → 诱导表达 → 蛋白提取 → 纯化 → 鉴定03蛋白表达详细步骤Step 1基因克隆与载体构建目的:将目标基因插入表达载体,获得重组质粒。操作:1)设计引物(含酶
DRUG-seq技术介绍DRUG-seq(Digital RNA with pertUrbation of Genes)是一种mRNA 3’端测序技术,通过特异性靶向poly-A尾,实现样本裂解液中的mRNA直接反转录。由于其仅聚焦转录本的3’序列,测序数据只需 2M/样本。该技术采用Barcoded 标签可实现多样本混合构建文库,而每个序列的UMI可以捕获
肾脏类器官是利用人多能干细胞在体外三维培养形成的“微型肾脏”,其包含足细胞、肾小管等多种关键细胞与结构,能高度模拟真实肾脏,为疾病建模、药物筛选与毒性评估提供了革命性的人类体外模型。本文根据《Nature Protocols》发表的文章,整理了人类多能干细胞生成肾脏类器官的培养方案。图1.hPSC分化为肾脏类器官的过程PART.1hPSCs的准备与铺板细胞消
细胞检测与分析是指利用各种技术和方法来研究细胞的结构、功能、状态以及其在不同条件下的变化。这些技术和方法广泛应用于生物学、医学、药学等领域,对于疾病的诊断、药物的开发和基础科学研究都具有重要意义。Yeasen围绕该流程提供完整产品线与技术支持,覆盖以下五大模块:细胞增殖与毒性、细胞凋亡与吞噬、细胞成像与示踪、细胞衰老和各种亚细胞结构研究。01细胞增殖与毒性细
反转录定义reverse transcription反转录过程简单来说是以RNA为模板合成DNA的过程,是对中心法则的重要修正和补充。中心法则RT通常会出现两个不同的表述,反转录和逆转录,二者的本质区别在于:反转录是在研究过程中人为提取RNA并以之为模板人工合成DNA的过程。逆转录是RNA病毒自主行为,以RNA为模板形成DNA的过程。前者发生在体外,后者发生
高通量测序技术为冠状病毒变异株及未知病原体的快速检出提供了无假设依赖的精准工具,有效规避了传统病原学研究对既有知识体系的路径依赖。 面对SARS-CoV-2变异株(如Alpha株系[B.1.1.7,英国]和Beta株系[B.1.351,南非])的全球性扩散及其引发的公共卫生挑战,构建基于大规模测序的实时突变监测网络,已成为遏制新型变异株传播的核心策略。 回溯
01巨噬细胞巨噬细胞的来源体内天然来源主要来源是骨髓造血干细胞,经单核细胞分化后迁移至组织,成熟为巨噬细胞。部分胚胎起源的巨噬细胞(如小胶质细胞),胚胎期定居组织后,通过局部增殖自我更新。体外实验来源骨髓来源:从骨髓中分离造血干细胞/单核细胞,体外诱导分化为骨髓来源巨噬细胞(Bone Marrow-Derived Macrophage,BMDM),是研究巨噬
01外周血单个核细胞(PBMC)外周血核心定义外周血是指除骨髓之外的、在全身循环系统中流动的血液。它与“骨髓血”相对。我们日常抽血化验(如指尖血、静脉抽血)所获取的都是外周血。主要成分外周血由血浆和血细胞两部分构成。血浆作为血液的液体部分,约占外周血总体积的55%,主要成分是水,还含有电解质、激素、白蛋白、凝血蛋白等物质。血细胞包含红细胞、白细胞、血小板等,
血液肿瘤是一类具有高度异质性的疾病,其诊疗需要结合形态学、免疫学、遗传学和分子生物学进行综合分析。二代测序(Next-generation sequencing, NGS)作为新的分子生物学技术,具有通量高、灵敏度高、成本低等优势,是探索血液肿瘤的分子发病机制并指导临床诊疗的重要手段。NGS在血液肿瘤诊疗中的应用价值01诊断分型基因突变的检测在急性髓系白血病
我们在进行qPCR实验时,不仅仅要确定自己的研究方向,确认目标基因,还要针对内参基因做好选择。内参基因的作用就是去除不同样本在RNA产量、质量以及反转录效率上可能存在的差别,从而获得目的基因特异性表达的真正差异。这里给小伙伴们举个例子。测试一款减少黑色素表达的药物,该药物以灌胃的形式给药至实验组小鼠,对照组小鼠仅以正常饮用水进行灌胃,以往大量研究已表明该药物