技术讲解双萤光素酶报告基因检测系统~实验操作篇

双萤光素酶报告基因系统一般将萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒共转染细胞，或将这两个报告基因构建到同一个骨架质粒上（如pGL4质粒），分别用不同的启动子启动其表达。

◆ 主报告基因载体的选择

根据实验目的选择对应的载体骨架。

◆ 内参报告基因载体的选择

带有表达组成型启动子的萤光素酶表达载体作为内参。

◆ 转染细胞系选择

◆ 转染方法选择

◆ 转染报告基因比例

◆ 启动子和转录因子比例

◆ 核酸与转染试剂的比例

从1:2开始调整，另外，注意质粒的纯度、完整度和去内毒素。

◆ 检测试剂选择

◆ 检测板选择

◆ 检测仪器选择

检测时间：辉光型0.5-1 sec，闪光型2-10 sec。

通过仪器可以直接读出萤火虫和海肾萤光素酶的数值，两种荧光值读数不少于4位数，读数大于8位数时，需要稀释裂解上清（读数与细胞种类、细胞状态、转染方法、转染时间等因素相关）。

归一化值=萤火虫萤光素酶读值（主报告基因）/海肾萤光素酶读值（内参基因）

相对表达倍数=实验组归一化值/对照组归一化值

给大家举个例子：